China Swine Industry

2023 年 第 6 期

以上不同阳性率区间分类，调查猪场 PRV 野毒感染的分

布情况。结果显示，2020—2022 年猪场野毒 PRV-gE

抗体阴性猪场分别为 23.53%、45.45%、61.54%，呈逐

年上升趋势。被检血清样本 gE 抗体阳性率大于 50.00%

的猪场 2020、2021、2022 年分别为 29.41%、18.18%、

11.54%。说明河南襄县部分猪场 PRV 野毒感染比例呈

逐年下降趋势。

3 讨论

PR 的传播途径是直接接触和间接接触传播，病毒

可经鼻液、口腔分泌物和呼吸道飞沫排出体外。据报

道，一头病猪可向外排出 105.3 TCID50 病毒[7]。血清学检

测是了解动物免疫前后血清抗体水平常用的方法，在疫

病诊治、流行病学调查方面发挥重要作用。传统血清学

检测方法存在操作繁琐、检测时间长、易出现误差等诸

多弊端，在 PRV 血清抗体检测中无法鉴别抗体来自野毒

感染猪还是疫苗免疫猪。PRV 属于疱疹病毒科，毒力由

几种基因协同控制，其中 gE 基因决定 PRV 在细胞间的

扩散，对 PRV 毒力至关重要[8]。而 gE-ELISA 抗体检测

血清能够识别出 PRV 野毒感染猪与 gE 基因缺失疫苗免

疫猪。目前，我国大部分猪场应用 gE 基因缺失苗接种

猪群，gE-ELISA 抗体检测为筛选野毒感染猪群，净化

和防控 PRV 提供了有效的检测工具。在我国发展规模化

猪场进程中，尤其重视对猪伪狂犬病控制和净化，多年

来高效 gE 抗体检测和 gE 基因缺失疫苗的广泛应用，不

断淘汰野毒阳性种猪，野毒阳性率基本控制在 10%以

下，甚至有些猪场多年达到净化目标，正朝着有利方向

发展[9,10]。但从 2011 年开始，猪伪狂犬病有新发生的趋

势，流行区域不断扩大，野毒感染率逐年上升[11]。

我国猪伪狂犬病的流行分布与猪场管理水平、猪场

所处区域、猪只生产阶段、疫苗选择及免疫程序等诸多

因素有关，猪场阳性率和血清抗体阳性率差异较大。段

群棚等[12]应用 gE-ELISA 对 2013—2016 年广西部分规

模猪场送检的血清样品进行 PRV-gE 抗体血清学检测，

猪场 PRV 野毒感染阳性率为 48.97%；受检猪血清样品

PRV-gE 抗体 阳性率为 22.56%。党占 国等[13]报道，

2012 年 1 月至 2015 年我国部分地区猪场 PRV-gE 阳性

猪场比例为 99.2%，血清 PRV-gE 阳性率为 43.9%。张

利平等[14]2021 年对河南省部分猪场开展了 PRV-gE 抗

体检测。PRV-gE 抗体总阳性率为 15.73%，场阳性率

为 34.50%，不同生产阶段 gE 抗体阳性率也存在差异，

其中保育猪、育肥猪、后备猪、经产母猪、种公猪血清

样品的 PRV-gE 抗体阳性率分别为 14.95%、23.46%、

10.52%、16.16%、5.27%。赵胜杰等[15]分别对来自 665

个场次的 20 147 份猪血清样品进行伪狂犬病毒 gE 抗体

检测，平均个体阳性率和场群阳性率分别为 20.93%和

47.97%。种猪场、商品代猪场、散养户和屠宰场 gE 抗

体个体阳性率依次升高，分别为 14.78%、21.51%、

23.08%和 24.71%；春季、夏季和冬季猪伪狂犬病毒 gE

抗体个体阳性率显著高于秋季。本研究结果显示，

2020—2022 年河南襄县猪场平均阳性率为 53.85%，血

清样品平均阳性率为 22.30%，且有逐年下降的趋势，

表明河南襄县猪场野毒感染情况虽然存在，但逐年下

降。从不同生产阶段猪群 PRV 野毒感染检测结果看，任

何日龄的猪群均可出现野毒感染现象，表明野毒感染可

存在生猪生长的任何阶段。妊娠母猪、种公猪阳性率相

对较高，分别为 34.44%、24.36%，说明猪饲养周期长

从而增加了野毒感染机会。哺乳仔猪、保育猪也有 gE

抗体阳性病例，说明母猪免疫效果不理想，需要科学制

定免疫程序。

表 3 2020 表 3要不同剂量的益生菌制剂对仔猪血清免疫指标的影响 2022年河南襄县部分猪场PRV野毒感染阳性率区间分布

2020 年 2021 年 2022 年

阳性率区间

猪场数/家 猪场比例/% 猪场数/家 猪场比例/% 猪场数/家 猪场比例/%

0 4 23.53（4/17） 10 45.45（10/22） 16 61.54（16/26）

0～25% 6 35.29（6/17） 5 22.73（5/22） 4 15.38（4/26）

25%～50% 2 11.76（2/17） 3 13.64（3/22） 3 11.54（3/26）

50%以上 5 29.41（5/17） 4 18.18（4/22） 3 11.54（3/26）

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2023 年 第 6 期

渊上接第 92页冤

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4 小结

当前，我国猪场依然受到猪伪狂犬病的威胁，且面

临一些新问题和新挑战，猪一旦感染伪狂犬病病毒就会

终生带毒，带毒种猪成为散毒和传播病毒的源头。本研

究采集的血清样本均来自接种了 PRV-gE 缺失苗的猪

场，而猪场野毒感染比较普遍，应引起重视，需要进一

步加强落实生物安全措施，制定科学的净化实施计划，

除严格消毒防疫和饲养管理外，重点关注引种检疫、筛

选和淘汰阳性猪群、规范疫苗免疫程序、抗体监测等环

节，只有这样，才能达到净化防控猪伪狂犬病流行的成

效。

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2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.021

收稿日期：2023-05-24

作者简介：丘富安 （1992-），男，硕士，研究方向为中西兽医结合

* 通信作者：秦韬 （1981-），男，博士，副教授，主要从事中西兽医结合方面的研究

次氯酸消毒液对伪狂犬病病毒核酸降解

作用及其消毒效果评价

丘富安 1 王 涛 2 廖维连 3 陈仕雄 1 秦 韬 2*

渊

1福州中科基因技术有限公司袁 福建福州 350000曰

2福建农林大学袁 福建福州 350000曰

3将乐县动物疫病预防控制中心袁

福建三明 353300冤

摘 要院 本试验旨在探索一款能够高效降解伪狂犬病病毒核酸的消毒剂并模拟该消毒剂在猪场实际消毒场景下的消毒效果袁

以指导养殖场的伪狂犬病防控工作袁 提高养殖场生物安全能力遥 用伪狂犬病病毒阳性组织研磨液作为消毒对象袁 使用 7.5尧

15尧 30尧 60 ppm 的次氯酸消毒液在常温和 4益环境中分别消毒 10尧 15尧 30尧 45 min袁 并比较浸泡 渊10尧 15尧 30尧 45

min冤尧 喷雾 渊10尧 15尧 30尧 45 min冤尧 擦拭 渊2尧 5尧 20尧 50 次冤 和高压冲洗 渊1尧 2尧 5尧 10 min冤 的方式对病毒核酸的

降解作用遥 此外袁 对常见的猪场物资如不锈钢尧 塑料瓶尧 塑料袋尧 编织袋尧 疫苗瓶尧 水泥地尧 瓷砖尧 报纸尧 衣服尧 鸡蛋壳尧

泡面尧 青菜尧 轮胎尧 木板表面涂抹等量的伪狂犬病病毒阳性组织研磨液袁 用过量的 60 ppm 次氯酸消毒液浸泡 20 min袁 采

用荧光PCR法对消毒后样品表面进行采样检测遥 结果显示袁 30 min消毒时间内袁 只有 60 ppm 次氯酸组检测为阴性遥 常温

环境下所有逸30 ppm 组和 15 ppm 45 min 组均为阴性遥 4益和常温环境下所有逸30 ppm 组均为阴性遥 消毒方式中所有浸

泡组尧 高压组尧 喷雾45 min 组尧 擦拭20 次组尧 擦拭50 次组检测均为阴性遥 养殖场常规物资表面用过量的 60 ppm 次氯酸

消毒 20 min 后结果均为阴性遥 综上所述袁 次氯酸消毒剂是一种高效的消毒剂袁 用来冲洗和浸泡均能够快速高效降解养殖场

常见物资表面的伪狂犬病病毒核酸袁 且低温对次氯酸消毒剂有一定抑制影响遥

关键词院 猪场曰 伪狂犬病曰 次氯酸曰 消毒曰 核酸降解

中图分类号院 S828曰S852.65 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0097-06

开放科学渊资源服务冤标识码渊OSID冤袁扫一扫袁了解文章更多内容

Evaluation of Hypochloric Acid Disinfectant on Pseudorabies Virus Nucleic Acid

Degradation and Its Disinfection Effect

QIU Fuan1，WANG Tao2，LIAO Weilian3，CHEN Shixiong1，QIN Tao2*

(

1Fuzhou Zhongke Gene Technology Co., Ltd., Fuzhou 350000, China; 2Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou 350000, China; 3

Jiangle County Animal Disease Prevention and Control Center，Sanming 353300, China)

Abstract: The purpose of this experiment was to explore adisinfectant that could efficiently degrade the nucleic acid of pseudorabies

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伪狂犬病病毒在世界多国猪场都有广泛的感染，早

在 1902 年匈牙利微生物学家就关注并描述了该病。伪

狂犬病是由疱疹病毒科的伪狂犬病病毒 （Pseudorabies

virus, PRV） 引起的仔猪神经症状，成年猪呼吸道症状以

及种母猪咳嗽、发烧、流产、产木乃伊胎、产死胎等繁

殖障碍，种公猪睾丸肿胀和种用性能降低等症状。由于

伪狂犬病病毒对我国的生猪养殖业产生了巨大的影响[1]，

早在 2012 年原农业部印发的关于 《2012 年国家动物疫

病监测计划》 通知中对伪狂犬病净化做出指导，也对畜

牧业的生物安全和防疫意识方面带来促进和变革[2]。伪

狂犬病病毒会通过鼻液、唾液、乳汁、阴道分泌液、血

液及实质性器官等进行排毒传播，所以消毒是养猪场做

到伪狂犬病净化的关键措施之一，最常用的消毒方法有

生物、化学和物理消毒法。化学消毒法具有获取简单、

经济方便、作用速度快、杀菌谱广等优势被猪场应用在

防控和饲养管理的各个环节中。目前，化学消毒剂 （含

氯类、过氧化物类、醛类、醇类、含碘类、酚类、双胍

类和季铵盐类消毒剂等） 市场种类较多，各类消毒剂理

化性质不一，实际消毒现场环境干扰因素繁多[3,4]。

在疫病日常监测中，采用的荧光 PCR 法具有方便、

快捷、价格低廉等优点被广大养殖户所应用[5]，也是临

床检测伪狂犬病病毒最为常用的方法之一，所以应用荧

光 PCR 法检测消毒后的核酸残留能够大量、快速且多维

度去评价消毒剂的效果。本试验使用伪狂犬病病毒作为

研究对象，采用荧光 PCR 检测技术，探索有效消毒产品

在不同的消毒剂浓度、消毒时间、消毒温度以及模拟不

同的消毒场景下对病毒核酸降解效果，为养殖场的疫病

净化和防疫消毒提供了科学理论基础。

1 材料及仪器

1.1 试验材料

次氯酸消毒液，有效含量：500 ppm，购自江苏某

生物科技有限公司。猪伪狂犬病病毒阳性组织研磨液

（福州中科基因技术有限公司检测 Ct 值为 26.31）。注射

器、伪狂犬病病毒核酸荧光 PCR 检测试剂盒由广州维伯

鑫生物科技有限公司生产。核酸提取试剂盒由济凡生物

科技(常州)有限公司生产。PBS 缓冲液、5 mL 离心管、

50 mL 离心管、棉签由北京兰杰柯科技有限公司生产。

20 cm×27 cm×4.8 cm 不锈钢方盘由佛山市金骏宝不

锈钢有限公司生产。各种消毒剂，均购于国内知名厂家，

合格产品，现配现用。

virus and simulate its disinfection effect in actual disinfection scenarios in pig farms. In order to guide the prevention and control of

pseudorabies in farms and improve their biosafety capabilities. Used pseudorabies virus positive tissue grinding fluid as a disinfection

object and used 7.5, 15, 30 and 60 ppm hypochlorite disinfectant to disinfect at room temperature and 4℃ for 10, 15, 30 and 45 min,

respectively. The effects of immersion (10, 15, 30, 45 min), spray (10, 15, 30, 45 min), wiping (2, 5, 20, 50 times) and high-pressure

washing (1, 2, 5, 10 min) on nucleic acid degradation were compared. In addition, for common pig farm materials such as stainless

steel, plastic bottles, plastic bags, woven bags, vaccine bottles, cement floors, tiles, newspapers, clothes, egg shells, instant noodles,

vegetables, tires, and wooden boards, applied an equal amount of pseudorabies virus positive tissue grinding fluid to the surface.

Soaked in an excess of 60 ppm hypochlorite disinfectant for 20 minutes, and used fluorescence PCR method to sample and tested the

disinfected surface. The results showed that within 30 minutes of disinfection, only the 60 ppm hypochlorite group tested negative. All ≥

30 ppm groups and 15 ppm 45 min groups in ambient environment were negative. All ≥30 ppm groups were negative at 4℃ and normothermic environments. In the disinfection method, all immersion groups, high-pressure groups, spray 45 min groups, wiping 20 times

groups, wiping 50 times groups were negative. After 20 minutes of disinfection with excessive 60 ppm hypochlorite on the surface of

conventional materials in the breeding farm, the results were all negative. In summary, hypochlorite disinfectant was an efficient disinfectant that could quickly and efficiently degrade the pseudorabies virus nucleic acid on the surface of common materials in breeding

farms when used for flushing and soaking. Low temperature also had a certain inhibitory effect on hypochlorite disinfectant.

Key words: pig farm; pseudorabies; hypochloric acid; disinfect; nucleic acid degradation

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1.2 试验仪器

荧光定量 PCR 仪购自杭州朗基科学仪器有限公司，

全自动核酸提取仪购自济凡生物科技(常州)有限公司，

离心机购自湖南湘仪离心机仪器有限公司。

2 试验方法

2.1 不同消毒方式对伪狂犬病病毒核酸降解作用

将猪伪狂犬病病毒组织研磨液涂抹于洁净的不锈钢

方盘内，涂抹面积为 10 cm×10 cm （如图 1）。待表面

风干后，分别加入 75%酒精、3% NaOH、6% NaOH、

3%碘伏、0.5%过硫酸氢钾、10%二氯异氰尿酸钠、3%

过氧化氢、3%二氧化氯、0.05%苯扎溴铵、60 ppm 次

氯酸、2%戊二醛、1%过氧乙酸消毒液 （均为说明书建

议现场消毒常用浓度） 倒入不锈钢方盘内，然后于室温

下静置反应 30 min。同时设置用涂抹猪伪狂犬病病毒阳

性组织研磨液的不锈钢方盘在臭氧、高温高压 （70℃、

90℃、120℃、150℃），以及紫外灯照射消毒环境下，

消毒时间均为 30 min （紫外灯照射设置 30 min 和 2 h），

另设纯净水组作为对照。消毒结束后，使用棉签对不锈

钢方盘底部采样并用 1 mL 无菌生理盐水对棉签浸泡，

最后对收集的洗脱液进行伪狂犬病病毒核酸检测，比较

常用的消毒方式之间的消毒效果。

2.2 不同温度尧 不同时间尧 不同浓度次氯酸消毒

液对伪狂犬病病毒核酸降解作用

常温 （21℃左右） 条件下，将等量的猪伪狂犬病病

毒阳性组织研磨液均匀涂抹于洁净的不锈钢方盘内，涂

抹面积为 10 cm×10 cm。待表面风干后，分别取 50

mL 的 7.5、15、30、60 ppm 次氯酸消毒液倒入不锈钢

方盘内，然后于室温下静置 10、15、30、45 min （详见

表 1），计时结束立即加入 10 g/L 的硫代硫酸钠溶液

50 mL，终止反应 1 min 后，倒去不锈钢方盘内液体并

竖立晾干，使用棉签对不锈钢方盘底部采样并用 1 mL

无菌生理盐水对棉签浸泡，最后对收集的洗脱液进行伪

狂犬病病毒核酸检测。低温 （4℃左右） 条件下的试验

方法与常温条件下的方法一致。

2.3 消毒方式作用试验

2.3.1 浸泡组

将等量的猪伪狂犬病病毒阳性组织研磨液均匀涂抹

于洁净的不锈钢方盘内，涂抹面积为 10 cm×10 cm。

待表面风干后，分别取 50 mL 的 60 ppm 次氯酸消毒液

倒入不锈钢方盘内，然后于室温下静置 10、15、30、

45 min，计时结束立即加入 10 g/L 的硫代硫酸钠溶液

50 mL 终止反应，1 min 后倒去不锈钢方盘内液体并竖

立晾干，使用棉签对不锈钢方盘底部采样并用 1 mL 无

菌生理盐水对棉签浸泡，最后对收集的洗脱液进行伪狂

犬病病毒核酸检测。

2.3.2 喷雾组

将等量的猪伪狂犬病病毒阳性组织研磨液均匀涂抹

于洁净的不锈钢方盘内，涂抹面积为 10 cm×10 cm。

待表面风干后，使用喷壶装置 60 ppm 次氯酸消毒液喷

洒于不锈钢方盘内，喷雾至雾滴形成单层致密排列即

可。然后于室温下静置 10、15、30、45 min，计时结束

立即加入 10g /L 的硫代硫酸钠溶液 50 mL，终止反应 1

min 后倒去不锈钢方盘内液体并竖立晾干，使用棉签对

不锈钢方盘底部采样并用 1mL 无菌生理盐水对棉签浸

泡，最后对收集的洗脱液进行伪狂犬病病毒核酸检测。

2.3.3 擦拭组

将等量的猪伪狂犬病病毒阳性组织研磨液均匀涂抹

图1 猪伪狂犬病病毒阳性组织研磨液涂抹方法和用于试验的不锈钢方盘

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于洁净的不锈钢方盘内，涂抹面积为 10 cm×10 cm。

待表面风干后，使用 60 ppm 次氯酸消毒液浸湿的纱布

来回重压擦拭不锈钢方盘 2、5、20、50 次。使用棉签

对不锈钢方盘底部采样并用 1 mL 无菌生理盐水对棉签浸

泡，最后对收集的洗脱液进行伪狂犬病病毒核酸检测。

2.3.4 高压冲洗组

将等量的猪伪狂犬病病毒阳性组织研磨液均匀涂抹

于洁净的不锈钢方盘内，涂抹面积为 10 cm×10 cm。待

表面风干后，使用冲牙器装置 60 ppm 次氯酸消毒液连续

冲洗不锈钢方盘内部，冲洗时间为 1、2、5、10 min，计

时结束立即加入 10 g/L 的硫代硫酸钠溶液 50 mL 终止

反应 1 min 后倒去不锈钢方盘内液体并竖立晾干，使用

棉签对不锈钢方盘底部采样并用 1 mL 无菌生理盐水对

棉签浸泡，最后对收集的洗脱液进行伪狂犬病病毒核酸

检测。

2.4 不同物资消毒效果

将猪伪狂犬病病毒阳性组织研磨液均匀涂抹于常见

的猪场物资如不锈钢、塑料瓶、塑料袋、编织袋、疫苗

瓶、水泥地、瓷砖、报纸、衣服、鸡蛋壳、泡面、青菜、

轮胎、木板等表面。待表面风干后，取足够的 60 ppm

次氯酸消毒液浸泡 20 min，计时结束立即加入 10 g/L 的

硫代硫酸钠溶液终止反应 1 min 后使用棉签对不锈钢方

盘底部采样并用 1 mL 无菌生理盐水对棉签浸泡，最后

对收集的洗脱液进行伪狂犬病病毒核酸检测。

2.5 结果判定

试验成立条件：阴性对照无 Ct 值，无明显指数增长

期和平台期。阳性对照 FAM 通道 Ct 值≤30，有明显指

数增长，呈典型的“S 形”曲线。

判定标准：样品检测 Ct 值小于 40 判定为阳性，呈

典型的“S 形”曲线。

3 结果和分析

3.1 不同消毒方式对伪狂犬病病毒核酸降解作用

对 75%酒精、3% NaOH、6% NaOH、3%碘伏、

0.5%过硫酸氢钾、10%二氯异氰尿酸钠、3%过氧化氢、

3%二氧化氯、0.05%苯扎溴铵、60 ppm 次氯酸、2%戊

二醛、1%过氧乙酸消毒液和臭氧、高温高压、紫外光进

行伪狂犬病毒核酸降解作用试验，结果可知 （见表 1），

60 ppm 次氯酸组和紫外光 2 h 组为阴性。说明在 30

min 消毒时间内，测试组中只有 60 ppm 的次氯酸消毒

液具很好地降解伪狂犬病病毒核酸的作用。此外，紫外

光照射 30 min 未能完全降解猪伪狂犬病病毒阳性组织研

磨液内的核酸，至少需要 2 h 才可完成核酸降解。

3.2 常温下不同时间尧 不同浓度的次氯酸消毒液

对伪狂犬病病毒核酸降解作用

由结果可 知 （见 表 2），所有≥30 ppm 组和 15

ppm、45 min 组结果为阴性。说明在常温环境下，消毒

时间、消毒浓度与核酸的降解效果呈现明显的正相关，

并且次氯酸消毒剂浓度≥30 ppm 和消毒时间≥10 min，

对猪伪狂犬病病毒阳性组织研磨液内的核酸均有很好的

降解作用。此外，浓度为 15 ppm 次氯酸消毒剂在消毒

表1 不同消毒方式对伪狂犬病病毒核酸降解作用

组别 Ct 值 判定结果

阳性组织研磨液 26.31±0.41 阳性

纯净水组 27.31±0.43 阳性

75%酒精组 29.03±0.69 阳性

10%二氯异氰尿酸钠 36.76±0.30 阳性

3%过氧化氢 34.28±0.97 阳性

3%二氧化氯 32.9±0.45 阳性

1%苯扎溴铵 29.41±0.56 阳性

60 ppm 次氯酸组 - 阴性

3% NaOH 组 28.74±0.30 阳性

6% NaOH 组 27.32±0.32 阳性

3%碘伏 30.45±0.44 阳性

0.5%过硫酸氢钾 39.32±0.49 阳性

戊二醛组 29.69±0.37 阳性

1%过氧乙酸组 32.24±0.34 阳性

臭氧组 30.29±0.63 阳性

70℃高压组 18.92±0.10 阳性

90℃高压组 27.31±0.41 阳性

120℃高压组 19.11±0.68 阳性

150℃高压组 20.41±0.44 阳性

紫外光 30 min 组 36.08±0.18 阳性

紫外光 2 h 组 - 阴性

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

100

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

时间≥45 min 时也能完全降解猪伪狂犬病病毒核酸。

3.3 低温下不同时间尧 不同浓度的次氯酸消毒液

对伪狂犬病病毒核酸降解作用

由结果可知 （见表 3），所有≥30 ppm 组结果均为

阴性。说明在 4℃环境下，消毒时间、消毒浓度与核酸

的降解效果呈明显的正相关，并且次氯酸消毒剂浓度≥

30 ppm 和消毒时间≥10 min，对猪伪狂犬病病毒阳性

组织研磨液内的核酸均有很好的降解作用。且低温环境

下，相同时间，相同浓度的实验组 Ct 值都会比常温下的

Ct 值低。说明低温对次氯酸消毒剂有一定抑制影响。

3.4 消毒方式作用试验

由表 4 可知，所有浸泡组、高压组、喷雾 45 min

组、擦拭 20 次组、擦拭 50 次组均为阴性，说明消毒方

式采用浸泡和高压冲洗且消毒时间≥10 min，对猪伪狂

犬病病毒阳性组织研磨液内的核酸均有很好的降解作

用。来回重压擦拭≥20 次或喷雾消毒超过 45 min 也能

够降解伪狂犬病病毒核酸。

表 2 常温下不同时间尧 不同浓度的次氯酸消毒液

对伪狂犬病病毒核酸降解作用

组别 消毒时间/min Ct 值 判定结果

10 - 阴性

15 - 阴性

30 - 阴性

60 ppm 组

45 - 阴性

10 - 阴性

15 - 阴性

30 - 阴性

30 ppm 组

45 - 阴性

10 36.85±0.44 阳性

15 38.1±0.7 阳性

30 39.36±0.36 阳性

15 ppm 组

45 - 阴性

10 31.36±0.1 阳性

15 31.38±0.29 阳性

30 31.47±0.47 阳性

7.5 ppm 组

45 32.01±0.14 阳性

表 3 低温下不同时间尧 不同浓度的次氯酸消毒液

对伪狂犬病病毒核酸降解作用

组别 消毒时间/min Ct 值 判定结果

10 - 阴性

15 - 阴性

30 - 阴性

60 ppm 组

45 - 阴性

10 - 阴性

15 - 阴性

30 - 阴性

30 ppm 组

45 - 阴性

10 32.99±0.35 阳性

15 33.01±0.3 阳性

30 34.88±0.67 阳性

15 ppm 组

45 36.81±0.69 阴性

10 29.27±0.29 阳性

15 29.74±0.56 阳性

30 30.57±0.28 阳性

7.5 ppm 组

45 30.87±0.57 阳性

表4 消毒方式作用试验

组别 消毒 Ct 值 判定结果

10 - 阴性

15 - 阴性

30 - 阴性

浸泡时间/min

45 - 阴性

10 34.8±0.35 阳性

15 35.5±0.43 阳性

30 38.6±0.28 阳性

喷雾时间/min

45 - 阴性

2 32.48±0.35 阳性

5 36.08±0.28 阳性

20 - 阴性

擦拭次数/次

50 - 阴性

1 - 阴性

2 - 阴性

5 - 阴性

高压冲洗时间/min

10 - 阴性

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

101

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

3.5 不同物资表面消毒效果

针对涂抹了猪伪狂犬病病毒阳性组织研磨液的猪场

常见物资如不锈钢、塑料瓶、塑料袋、编织袋、疫苗瓶、

水泥地、瓷砖、报纸、衣服、鸡蛋壳、泡面、青菜、轮

胎、木板等采用次氯酸消毒，结果显示，每个试验组的

猪伪狂犬病病毒核酸检测均为阴性，说明 60 ppm 次氯

酸消毒液消毒 20 min 能有效降解这些物资表面的猪伪狂

犬病病毒核酸。

4 讨论

猪伪狂犬病危害整个养猪业，在 2011 年伪狂犬病

病毒的变异毒株席卷全国，其蔓延速度和危害都令人畏

惧，给整个国家的相关产业、贸易以及社会就业、人民收

入、肉食品供应和食品安全等诸多方面带来严重影响[6,7]。

在伪狂犬病的净化道路上，国内外众多学者前赴后

继总结出很多净化的方案，荧光 PCR 法成为最常用的猪

伪狂犬病病毒的监测手段之一。检测和消毒在伪狂犬病

病毒的净化中均扮演着十分重要的角色，消毒是生物安

全的重要组成部分，影响消毒效果的主要因素有消毒剂

的浓度、消毒剂使用的时间、消毒剂的温度、环境中有

机物的存在以及微生物的敏感性等[8,9]。为了能够有效地

指导养殖者消毒，本试验用猪场常用的各类消毒剂按说

明书配置消毒浓度，使用的消毒剂有 75%酒精、3%

NaOH、6% NaOH、3%碘伏、0.5%过硫酸氢钾、10%

二氯异氰尿酸钠、3%过氧化氢、3%二氧化氯、0.05%

苯扎溴铵、60 ppm 次氯酸、2%戊二醛、1%过氧乙酸消

毒液等，并使用猪场常用的其他消毒手段如臭氧、高温

高压、紫外光进行研究，试验采用猪伪狂犬病病毒作为

被消毒对象，消毒时间为 30 min，因为在日常消毒工作

中，没有过多的消毒等待时间，所以能在短时间降解核

酸的消毒方式才更加能够受到养殖者的青睐。本试验结

果进一步说明次氯酸消毒剂降解核酸能力较突出。此

外，试验模拟了不同消毒时间、消毒浓度、消毒方式和

不同物资表面进行消毒效果评价，结果发现，常温环

境，次氯酸消毒剂浓度≥30 ppm 和消毒时间≥10 min

均能有效降解猪伪狂犬病毒核酸。但是 4℃环境相比常

温环境，相同消毒时间，相同次氯酸浓度的试验组 Ct 值

都会比常温下的 Ct 值低，说明低温对次氯酸消毒剂有一

定抑制影响。养殖场在冬季应谨慎使用，消毒时可选在

中午温度高于 4℃且提高消毒浓度和消毒时间则可保证

消毒效果。周德刚[10]建议了养殖场选择消毒剂和如何使

用次氯酸消毒剂，为养殖场科学消毒奠定理论基础。根

据在消毒方式和不同物资表面的消毒试验，建议养殖者

在消毒时采用浸泡和高压冲洗有利于病毒核酸降解，且

次氯酸对核酸降解效果适用于常见的物资表面。

在伪狂犬病净化政策推动中，农业农村部将对伪狂

犬病的净化工作做出进一步的指导，对消毒等生物安全

措施都有提及。未来，动物疫病的防控仍然很严峻，动

物疫病的净化之路也会是漫长的。次氯酸消毒剂对严重

困扰养殖业的非洲猪瘟病毒 （同为含囊膜的 DNA 病毒）

消杀效果值得学者们关注，此外，猪繁殖与呼吸综合征、

流行性腹泻病和寄生虫病等比较常见且难解决的动物疫

病敏感性也需要进一步验证，让养殖者能够提高防疫能

力，确保场内生物安全。

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猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.022

收稿日期：2023-03-16

作者简介：喻道友 （1974-），男，汉族，河南信阳人，硕士，兽医师，研究方向为动物疫病防治

由母猪返饲引发的

猪伪狂犬病及防控案例

喻道友 1 丁 盈 1 王 凯 1 宫利宏 1 苍 枫 2 庄金山 3 韩 涛 3

渊

1 金宇保灵生物动物药品有限公司袁 内蒙古呼和浩特 010000曰

2 内蒙古金准检测技术有限公司袁 内蒙古呼和浩特

010000曰

3内蒙古金迈诗生物科技有限公司袁 内蒙古呼和浩特 010000冤

摘 要院 本文报告了某规模化猪场因母猪返饲导致猪伪狂犬病发生后的控制案例遥 某猪场产房仔猪群发生腹泻袁 使用返饲治

疗未取得应有效果袁 并导致猪群发生伪狂犬病遥 猪群发病后袁 猪场使用 野伪狂宁冶 对各阶段猪群实行紧急免疫尧 通过检测淘

汰 gE 阳性公猪和调整免疫程序尧 加强生物安全和生产管理袁 猪伪狂犬病流行情况很快得到控制遥 建议养猪企业谨慎使用返

饲的方式治疗猪的腹泻病等遥

关键词院 猪伪狂犬病曰 伪狂宁曰 紧急免疫曰 gE 抗体曰 生物安全

中图分类号院 S828曰S852.65 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0103-03

开放科学渊资源服务冤标识码渊OSID冤袁扫一扫袁了解文章更多内容

猪伪狂犬病 （Pseudorabies, PR） 是由伪狂犬病病

毒引起的一种急性传染病[1]，我国将其列为二类动物疫

病。其病原体为疱疹病毒科的猪疱疹病毒 I 型病毒，脑

脊髓组织中含量较多[2]。该病毒感染极广，报道称有近

35 种动物可以被感染[3]。伪狂犬病毒在自然界不断循环，

是典型的自然疫源性疾病[4]，也是极难预防和治疗的传

染病之一[5]。猪是感染该病毒且不容易致死的宿主[6]，所

以也是该病毒的主要储存体，也最易感[7]。猪感染伪狂

犬病后，随着日龄的增长，死亡率明显下降，成年猪轻

微发病，但极少死亡，一般不容易引起猪场重视[8]。该

病一年四季均可以发生，但以冬春和产仔旺季多发[9]。

近年来，该病呈现复杂化，给猪场防控带来新的挑战[10]。

本团队在猪场技术服务过程中参与处理多起猪伪狂犬病

临床案例，其中 1 个典型案例报告如下。

1 猪场背景与发病过程

安徽某规模化猪场存栏能繁母猪 1 000 头，新引种

后备母猪 200 头，自繁自养。猪场使用某进口猪伪狂犬

病活疫苗（Bathar-K61） 免疫，母猪群普免 3 次 / 年，后

备母猪进群前间隔 1 个月免疫 2 次，商品猪免疫 2 次，连

续用多年，但育肥猪一直存在呼吸道疾病，但不严重。

2018 年 12 月，产房仔猪群发生腹泻，持续了 4 个

月，期间使用过返饲方法治疗，未取得应有效果。2019

年 9 月中旬一定数量的妊娠母猪出现发烧、流产，流产

多以中后期为主，且流产的母猪中以后备母猪居多，流

产率达到 15%。新生仔猪出现神经症状，呈现划水状、

口吐白沫并相继死亡，存活仔猪发生顽固性腹泻，灌服

或肌肉注射抗生素没有效果。猪群总体发病率达到

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

30%。随后保育猪、育肥猪出现咳嗽、喘气、关节肿大

等症状，使用替米考星、多西环素、麻杏石甘散拌料，

效果不明显。发病猪只剖检发现，扁桃体坏死，肝脏和

脾脏表面有散在黄白色疱疹样坏死灶 （1～3 mm），肾脏

有针尖样出血点。

采血送当地农业高校实验室检测，结果发现，流产母

猪伪狂犬病毒 gE 抗体阳性率 100%，全群母猪伪狂犬病野

毒抗体超过 50%，公猪野毒抗体阳性率 50%，阳性率远高

于以往数据。表明该场发生猪伪狂犬病，且属于重度感染。

2 防控措施

根据该场实际情况，制定了相应的综合防控方案。

2.1 科学免疫

第一阶段：紧急免疫；用猪伪狂犬病毒耐热保护剂

活疫苗 （C 株） “伪狂宁”加强各阶段猪群免疫，以有

效提升猪伪狂犬病毒 gB 抗体水平，同时淘汰伪狂犬病

毒 gE 阳性公猪。母猪群、公猪群、后备猪紧急普免

“伪狂宁”2 头份 / 头，间隔 1 个月再次普免“伪狂宁”

1 头份 / 头，以后按照 3～4 次 / 年进行免疫。初生仔猪：

1～3 日龄滴鼻“伪狂宁”1 头份 / 头，每个鼻孔 0.5 头

份；产房仔猪普免“伪狂宁”0.5 头份 / 头。保育猪和育

肥猪普免“伪狂宁”1 头份 / 头，间隔 1 个月再加强 1 次。

第二阶段：疫情稳定后调整免疫程序；经产母猪和

种公猪普免“伪狂宁”1 头份 / 头，之后每间隔 4 个月

免疫“伪狂宁”1 次，每次 1 头份，即 1 年普免 3 次。

后备母猪在 160 日龄免疫“伪狂宁”1 头份 / 头，190

日龄左右再免疫“伪狂宁”1 头份 / 头，即配种前免疫 2

次。1～3 日龄仔猪用“伪狂宁”滴鼻 1 头份 / 头，每个

鼻孔 0.5 头份；60～70 日龄和 90～100 日龄猪分别肌肉

注射“伪狂宁”1 头份 / 头。

2.2 加强公猪和后备猪的检测

持续对猪场所用的全部公猪精液进行 PCR 检测伪狂

犬病毒 gE 抗原，或采集血液检测伪狂犬病毒 gE 抗体，

公猪精液 PCR 检测为阳性或血液中检测到伪狂犬病毒

gE 抗体阳性的猪只应立即淘汰。后备猪引进前进行严格

检疫，确保伪狂犬病毒野毒抗体、抗原为阴性。后备猪

配种前间隔 1 个月免疫 2 次“伪狂宁”，每次 1 头份。

2.3 加强猪场生物安全

加强产房的消毒工作，每天消毒 1 次，连续操作 2

周，以后每 2 d 消毒 1 次。保育舍和育肥舍 2～3 d 消毒

1 次。对场区过道用 4%火碱水进行喷洒消毒；在场区道

路上铺白灰，在白灰上喷洒 4%火碱，使地面形成封闭

层。加强进出的人员进行严格消毒。加强进入猪场的物

料、拉猪车辆的消毒与路线规划。加强灭鼠工作，定期

和不定期使用物理、化学、生物方法灭鼠，场区内严禁

饲养犬猫，严防流浪犬猫进入场区。

猪场生产对于分娩舍单元、保育舍单元和隔离舍严

格实行猪只全进全出和单向流动，避免转保混群和不同

批次猪只的混养，便于空栏消毒和生物安全管理。

2.4 防控效果跟踪

该场母猪通过紧急免疫后，未再出现流产情况；分

娩母猪泌乳正常，初生仔猪未出现神经症状和拉稀，哺

乳仔猪长势良好。哺乳仔猪紧急免疫后，神经症状和拉

稀症状轻的仔猪，病症消退，吃奶正常。育肥猪紧急免

疫后，采食和精神状况均正常。

3 分析与总结

3.1 猪蓝耳病尧 猪伪狂犬病阳性场不建议返饲

返饲是控制猪场病毒性腹泻的有效方法之一，但是

对猪群中伪狂犬病病毒、蓝耳病毒等阳性的猪场，返饲

会带来极大的风险[11]。经流行病学调查，该场发生猪伪

狂犬病的原因是仔猪发生流行性腹泻后对母猪进行了返

饲。当时该场猪伪狂犬病表现虽然不是很明显，但育肥

猪一直存在呼吸道问题，表明该场可能存在猪伪狂犬病

感染情况，属于猪伪狂犬病不稳定场，经检测 gE 抗体

为阳性。因此，当猪场发生流行性腹泻时，如果要采取

返饲措施，一定要考虑猪伪狂犬病可能转阳的问题[12]，

当然也要考虑诸如蓝耳病等转阳的问题。因此，对于猪

蓝耳病、猪伪狂犬病阳性猪场不建议进行返饲[13]。

3.2 猪伪狂犬病快速控制的关键

该场猪伪狂犬病快速控制的关键因素有 2 个，一是

选择质量可靠、免疫效果确切的猪伪狂犬病病毒疫苗进

行科学紧急免疫。根据该地区猪伪狂犬病病毒的流行毒

猪病防控 Swine Disease

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China Swine Industry

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株，建议选择种毒为变异毒株，且效价在 106.0 TCID50 以

上的猪伪狂犬病毒疫苗进行免疫[14]。二是需要对种猪、

仔猪、育肥猪同时免疫，以降低排毒和防止不同猪群之

间交叉感染[15]。

3.3 做好猪场公猪的精液品质检测

随着人工授精技术的普及，公猪精液也成为疾病传

播的重要途径之一[16]，为了阻断猪伪狂犬病病毒等通过

精液传播，必须保证公猪伪狂犬病病毒抗原、抗体阴

性，每季度对公猪进行 gE 抗体检测，对于 gE 抗体阳性

的种公猪必须淘汰[17]。

3.4 加强猪场生物安全

任何一个传染病的控制都需要控制传染源、切断传

播途径和保护易感动物[18]，猪伪狂犬病的控制也如此，

加强生物安全、加强饲养管理、提高猪群特异性和非特

异性免疫力等综合措施必须同时跟进[19]。猪伪狂犬病是

一种多种动物共患疾病，老鼠、犬和猫都是伪狂犬病病

毒的宿主，为了阻断伪狂犬病病毒的传播，猪场必须定

期做好灭鼠工作，猪场内严禁饲养犬、猫和其他动物[20]。

目前，猪伪狂犬病的净化技术已经十分成熟，为了彻底

控制伪狂犬病，建议猪场及时开展该病的净化工作。

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2021.104835.

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

105

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

种猪场猪伪狂犬病净化探索

蒙炳超 1 马 萍 2 李照伟 2 何 毅 1 陆跃堂 3 柏 城 4 郑敏萍 5*

渊

1黔南州养殖业发展中心袁 贵州都匀 558000曰

2贵州省动物疫病预防控制中心袁 贵州贵阳 550008曰

3独山县养殖业发展

中心袁 贵州独山 558200曰

4贵州日泉农牧有限公司袁 贵州独山 558200曰

5上海农林职业技术学院袁 上海 201600冤

摘 要院 以实现猪伪狂犬病的免疫净化尧 通过省级以上动物疫病净化评估为目标袁 按照国家动物疫病净化评估的标准袁 贵州

日泉农牧有限公司泉兴种猪场在引种为猪伪狂犬病gE 和gB抗体阴性情况下袁 通过建立保障机制尧 完善生物安全饲养管理尧

定期监测等措施袁 开展了猪伪狂犬病的免疫净化探索工作遥 净化结果为院 4 年来袁 在企业和官方保持对种猪场种公猪尧 基础

母猪尧 后备猪进行阶段性的猪伪狂犬病病毒监测下袁 检测 gE 抗体 16 086 份袁 检测结果全部为阴性袁 检测 gB 抗体 8 173

份袁 抗体平均合格率为 99.5%袁 全场无猪伪狂犬病临床病例发生遥 此外袁 按照 叶规模化种猪场主要疫病净化评估标准曳袁 做

好资料的收集和归档袁 做到各项标准有充分的材料或实物支撑遥 2022年该种猪场通过国家级猪伪狂犬病净化场评估袁 实现

猪伪狂犬病的免疫净化目标遥

关键词院 种猪场曰 猪伪狂犬病曰 疫病净化

中图分类号院 S828曰S858.28 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0106-04

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收稿日期：2023-04-28

作者简介：蒙炳超 （1984-），硕士，高级兽医师，主要从事动物疫病防控方面的工作

* 通信作者：郑敏萍 （1990-），硕士，讲师，主要从事动物医学方面的研究

Exploration on Purification of Pseudorabies in Pig Farms

MENG Bingchao1

, MA Ping2

, LI Zhaowei2

, HE Yi1

, LU Yuetang3

, BAI Cheng4

, ZHENG Minping5

(

1Qiannan Prefecture Breeding Development Center, Duyun 558000, China; 2Guizhou Animal Epidemic Disease Prevention and Control

Center, Guiyang 550008, China; 3Dushan County Breeding Development Center, Dushan 558200, China; 4Guizhou Riquan Agriculture

and Animal Husbandry Co., Ltd., Dushan 558200, China; 5Shanghai Agricultural and Forestry Vocational and Technical College, Shanghai 201600, China)

Abstract: The article aimed to achieve immune purification of porcine pseudorabies and to pass the evaluation of animal disease purification at the provincial level or higher. According to the standards of national animal disease purification evaluation, Guizhou Riquan Agricultural and Animal Husbandry Co., Ltd., Quanxing pig breeding farm introduced pigs with negative gE and gB antibody of pseudorabies. By

establishing a security mechanism, improving the biosafety management system, and conducting testing, explored the immune purification of porcine pseudorabies. The purification results showed that for the past 4 years, the enterprise and the authorities had monitored

breeding boars, sows and reserve pigs in the pig breeding farm for pseudorabies, with 16 086 tests for gE antibodies, all of which were

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.023

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒感染引起的一种以生

殖系统、呼吸系统和神经系统出现临床症状的传染病，

主要危害妊娠母猪和仔猪，造成母猪流产、产木乃伊

胎、产死胎、仔猪死亡率升高等，病毒可通过母体垂直

传播，也可通过犬、猫、鼠等储存宿主传播，还可通过

被猪伪狂犬病病毒污染的工作人员服装、器具及空气等

进行传播[1,2]。猪感染伪狂犬病病毒后没有特效治疗药

物，预防和控制猪伪狂犬病的有效方法是净化猪群和疫

苗免疫[3]。根据 《动物疫病净化场评估管理指南》 《动

物疫病净化场评估技术规范》 的相关要求和标准[4]，应

采用伪狂犬病的疫苗免疫、监测、规范饲养、生物安全

管理的净化技术，推动种猪场通过省级以上动物疫病净

化评估、实现猪伪狂犬病的免疫净化目标。贵州日泉农

牧有限公司 （以下简称“日泉公司”） 泉兴种猪场开展了

猪伪狂犬病免疫净化探索。

1 材料与方法

1.1 试验材料

国产商品化猪伪狂犬病 gE 抗体 （简称“gE 抗体”）

ELISA 检测试剂盒和猪伪狂犬病 gB 抗体 （简称“gB 抗

体”） ELISA 检测试剂盒。猪伪狂犬病疫苗采用勃林格殷

格翰公司生产的猪伪狂犬病弱毒疫苗 （Bartha-K61）。

1.2 试验方法

1.2.1 建立保障措施

一是组织保障，成立由公司总经理担任组长、场长

为副组长、种猪场内各部门负责人、实验室负责人为成

员的疫病净化工作实施小组；二是技术保障，邀请当地

动物疫病预防控制机构专家、集团公司养猪技术事业部

专家及高校老师组成疫病净化技术指导专家，全面负责

动物疫病净化的技术指导工作；三是经费保障，将疫苗、

动物疫病检测、消毒等经费列入养猪企业的年度经费预算。

1.2.2 完善生物安全和饲养管理

按照动物疫病净化评估要求，结合生物安全和饲养

管理实际情况，邀请当地动物疫病预防控制机构、集团

公司、大专院校的专家帮助不断完善生物安全和饲养管

理相关的制度、操作规程、消毒效果评估等，并督促、

指导做好管理措施的落实。

1.2.3 建立 gE 抗体阴性种猪群

⑴在引种前逐头采集猪只血清检测 gE 抗体和 gB 抗

体，选择 gE 抗体阴性、gB 抗体阳性猪作为引种猪只，

引种猪只调入种猪场专用引种隔离舍隔离 21 d，再做

gE 抗体和 gB 抗体检测。如果引种目标场未开展猪伪狂

犬病疫苗免疫，则 gB 抗体和 gE 抗体均为阴性猪作为引

种目标猪。通过引种建立 gE 抗体阴性种猪群。

⑵逐头采集免疫猪伪狂犬病疫苗 21 d 后的后备猪血

清，检测 gE 和 gB 抗体，gE 抗体为阴性、gB 免疫抗体

为阳性的猪只，可从后备舍转入种猪舍。gE 抗体阳性猪

只立即复检，若复核结果仍为阳性猪只，则立即淘汰。

1.2.4 种猪群净化维持

⑴1 年内分区域、分批次对种猪群进行 1 次猪伪狂

犬病 gE 抗体全覆盖检测，gE 抗体检测阴性的猪群不能

与未经 gE 抗体检测的猪群交叉混养，如果检出 gE 抗体

阳性猪，则对阳性猪进行淘汰处理。

⑵全群检测阶段外的猪群，以不少于无疫公式

（CL＝95%、P＝3%） 的采样数量，每季度采集 1 次种

公猪、基础母猪及后备猪血清样品进行 gE 抗体检测，

检测出 gE 抗体阳性猪则立即淘汰[4,5]。

⑶以不少于预估期望值公式 （CL＝95%、P＝90、

e＝10%），每季度采集 1 次种公猪、基础母猪、后备猪血

清进行 gB 抗体检测，评估猪伪狂犬病群体免疫效果。检

测结果出现群体免疫抗体合格率＜90%时，进行全群补

免，补免后再次采集血清样品进行检测[4]。

negative, and 8 173 tests for gB antibodies, with average of 99.5% of antibody qualification rate. The farm had not any clinical cases of

pseudorabies. According to the \"Evaluation Standards for Purification of Major Diseases in Large scale Pig Farms\", collected and archived

materials properly, ensured sufficient material or physical support for all standards. In 2022, the pig breeding farm passed the national-level assessment of pseudorabies purification fields, achieved the goal of immunological purification of pseudorabies in pigs.

Key words: pig breeding farm; pseudorabies; animal disease purification

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

107

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

⑷贵州省黔南州和独山县动物疫病预防控制机构按

照 《动物疫病净化评估技术规范》 相关要求，每年对种

猪场至少开展 2 次监督检验，采样覆盖不同猪群，每次

采样不少于 30 头份，分别检测 gE 抗体和 gB 抗体[4]。

2 净化结果

2.1 引种

2018 年日泉公司按照 1 年内引种的检测方案，引进

PIC 种猪 8 500 头，在隔离场对 8 500 头种猪全部进行

gE 和 gB 抗体检测，检测结果均为阴性 （引种前未进行

猪伪狂犬病疫苗免疫） 后转入种猪场，建立种猪场 gE

抗体阴性种猪群。

2.2 维持净化

2.2.1 监测抽检

种猪入场后，按程序开展猪伪狂犬病的疫苗免疫，

并按照维持猪场伪狂犬病净化的方法，对 gE 抗体和 gB

抗体进行检测。在 2019 年 1 月至 2021 年 7 月的抽检和

监督检验中，共检测基础母猪、后备猪、公猪 gE 抗体

7 659 份，检测结果全为阴性；检测 gB 抗体 7 121 份，

gB 抗体合格率为 99.9%。

2.2.2 全群检测

2021 年 8 月至 2022 年 5 月，分 7 批完成全群种猪

的 gE 抗体检测，共检测 8 427 份 （含 2 次监督检验），

gE 抗体全为阴性；在开展 gE 全群检测的同时，共抽检

1 052 份猪血清样品进行 gB 抗体检测 （含 2 次监督检

验），gB 抗体合格率为 97.1%。

4 年来，在维持阶段，企业和官方对种猪场种公猪、

基础母猪、后备猪进行猪伪狂犬病监测，共计检测 gE抗

体 16 086 份 ，检 测 结 果 全 为 阴 性，检 测 gB 抗 体

8 173 份，gB 免疫抗体平均合格率为 99.5%，全场无猪

伪狂犬病病例发生。

2.3 形成净化佐证资料

按照 《动物疫病净化场评估技术规范》 要求，对照

《规模猪场主要动物疫病净化审查评分表》，建立或完善

人员培训、净污道错时使用及消毒、无害化处理、消毒

管理、生产管理、防疫管理、疫病监测等相关的制度、

方案、操作规程，督促做好记录和资料的归档等，做到

各评分项有充分的材料或实物支撑。

3 讨论与分析

根据国内外动物疫病净化探索和实践，在规模化种

猪场开展猪伪狂犬病、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征等疫

病的净化，逐步形成一套我国规模化种猪场主要疫病净

化技术方案和评估标准，也建设一批主要动物疫病净化

示范场[6,7]。按照国家的动物疫病净化评估标准及相关的

动物疫病检测技术标准，口蹄疫、猪瘟的净化需要采集

活体猪扁桃体进行病原学检测，常规的口蹄疫、猪瘟和

高致病性猪繁殖与呼吸综合征等的血清学检测难以区分

野毒感染和疫苗免疫产生的抗体[5,6]。在工作实践中，由

于活体采集猪扁桃体技术要求高，猪只易产生应激等影

响种猪生产，养殖企业接受程度不高。猪伪狂犬病疫苗

为 gE 基因缺失苗，用商品化的 gE 和 gB 抗体检测试剂

盒，即可快速、便捷和低成本地区分疫苗抗体和野毒感

染抗体[8]。本文综合检测技术、养殖企业对采样方式的

接受度、经费需求、技术要求等因素考虑，将猪伪狂犬

病免疫净化作为本文净化探索的病种。

动物疫病净化是一项长期的工作，为此公司高度重

视，统筹做好组织保障、经费保障和技术保障工作。通

过成立猪伪狂犬病净化工作小组、做好疫病净化经费保

障、建立专家指导机制和养猪技术外部审计机制等 4 方

面开展工作。为了通过省级以上猪伪狂犬病净化评估和

实现猪伪狂犬病免疫净化的目标，在实施种猪场猪伪狂

犬病免疫和检测净化技术的基础上，按照 《动物疫病净

化示范场评估标准 （试行）》，将疫病净化检测与综合防

控措施同步建立、同步实施，由资料组负责人员管理、

卫生环保、无害化处理、消毒管理和疫病监测等相关的

制度、方案、操作规程、记录表格的制定和资料归档等，

确保 4 年来动物疫病净化资料的完整，做到各打分项有

材料或实物作为支撑。黔南州和独山县动物疫病预防控

制机构从 2019 年开始，将种猪场猪伪狂犬病净化的监

督检验列入年度动物疫病监测计划，每年开展不少于 2

次的监督检验[9]。根据 《规模化种猪场主要疫病净化评

估标准》，猪场在开展猪伪狂犬病净化的同时，积极推动

开展猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪口蹄疫等疫病的净

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

108

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

化探索，制定并落实净化监测方案，按照非洲猪瘟无疫

小区的管理要求，做好非洲猪瘟病毒的监测和防控[10]。

由于泉兴种猪场是新建场，且引种猪只全部为猪伪

狂犬病 gE 抗体阴性个体，因此，在净化策略上，主要

是实施免疫净化，做好维持和证明无猪伪狂犬病病毒感

染。在净化的维持阶段，每次采集不少于 100 头份血清

样品进行 gE 抗体检测，基于本文选用的几种国产 gE 和

gB ELISA 抗体检测试剂都没有标注试剂的敏感性和特

异性，抽样方法存在误差等，为更全面地评估和掌握猪

场的猪伪狂犬病维持情况，决定分批次开展一次 gE 抗

体的全群采样检测。但是全群采样检测对时间、人力、

财力要求较高，同行在开展无疫证明时，根据时间、人

力、经费等情况，可增加抽检频次、调整证明无疫公式

中的预期流行率等参数，或者在 gE 抗体检测的基础上，

对流产母猪、有疑似临床症状猪只、种猪场内部环境、

病死猪无害化处理区环境等高风险环节，引入猪伪狂犬

病荧光 RT-PCR、病毒分离等病原学检测方法，增加抽

样检测的准确性，也可较为科学地评估猪场猪伪狂犬病

的流行情况[11-13]。该场在开展猪伪狂犬病净化之初，即

按照 《动物疫病净化场评估技术规范》，建立并不断完

善饲养和生物安全管理的相关制度、方案、记录等，有

完整的猪场健康巡栏、诊疗、无害化处理、引种、淘汰、

销售等记录，科学的生产性能指标统计和分析方法，当

地动物疫病预防控制机构严格做好监督检验等，可更全

面地加以佐证猪场的净化效果，同时也为净化评估做好

支撑。在严峻的非洲猪瘟防控形势下，猪场建立了全面的

生物安全管理体系，提升生物安全管理水平，2020 年该

种猪场通过“国家首批非洲猪瘟无疫小区”评估认证[14-17]。

在完整的资料支撑和科学的检测保障下，2023 年该种猪

场的猪伪狂犬病免疫净化通过“国家级动物疫病净化

场”评估认证。因此，建议在开展动物疫病净化工作中，

应提前谋划，重视相关资料收集和做好疫病监测。

4 结论

在 4 年的猪伪狂犬病净化过程中，通过 gE 抗体抽

检和全群采样检测，gE 抗体检测都为阴性，抽检 gB 抗

体合格率都大于 90%，且在临床观察中，未发现猪伪狂

犬病临床病例。此外，加以完整的健康巡栏、诊疗、无

害化处理、引种、淘汰、销售等记录和科学的生产数据

及实验室检测等的佐证，较为全面反映了种猪场猪伪狂

犬病的监测净化情况，严格落实重大动物疫病防控措施，

该种猪场于2022 年通过“国家级猪伪狂犬病动物疫病净

化场”评估认证，实现猪伪狂犬病的免疫净化目标。

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猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.024

收稿日期：2023-03-07

作者简介：洪波 （1983-），男，浙江余姚人，本科，兽医师，主要从事动物疫病防疫检疫方面的工作

浙江省某猪场猪伪狂犬病的净化案例

洪 波 马燕强 刘益钱

渊杭州市种猪试验场袁 浙江杭州 311115冤

摘 要院 猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒引起的多种家畜和野生动物共患的急性传染病遥 猪是本病毒的自然宿主袁 感染

后袁 母猪发生繁殖障碍袁 公猪精液质量下降袁 仔猪出现死亡袁 育肥猪发生呼吸困难袁 对养猪业危害巨大遥 本文通过对浙江省

杭州市某二元种猪场开展的猪伪狂犬病净化过程进行详细阐述和分析袁 希望可以为其他猪场开展猪伪狂犬病净化提供参考遥

关键词院 猪曰 伪狂犬病曰 疫苗曰 检测曰 净化

中图分类号院 S828曰S852.65 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0110-03

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猪伪狂犬病 （Pseudorabies, PR） 是由猪伪狂犬病

病毒 （Pseudorabies virus, PRV） 感染猪而引起的一种

急性传染性疾病，是危害生猪健康养殖的重要疫病之

一[1,2]。PRV 属于疱疹病毒科 （Herpesviridae） α- 疱疹

病毒亚科，毒力是由几种基因协同调控，主要有胸苷激

酶 （TK） 基因、gE、gD、gI 基因等调控，缺失一种或

几种毒力基因，可使伪狂犬病毒的毒力下降，但仍保持

免疫原性[3]，这使得伪狂犬病基因工程苗对该病的预防

发挥了非常重要的作用，同时伪狂犬病病毒基因缺失蛋

白抗体的 ELISA 检测方法可以准确区分免疫抗体和野毒

感染抗体，这为猪场伪狂犬病的净化提供了理论基础[4]。

浙江省杭州市某二元种猪场有长白母猪 487 头，公猪

12 头，为了进一步提高种猪质量和生产成绩，利用近 3 年

时间对公猪、母猪、哺乳猪、保育猪、生长猪、后备种猪

实施采血检测、隔离淘汰、调整免疫程序等技术，同时严

控生物安全体系，完成了对该场猪伪狂犬病的净化任务。

1 试验材料

1.1 主要试剂

PRV-gE 抗体检测试剂盒、PRV-gB 抗体检测试剂

盒均购自 IDEXX 公司。血清样品的检测步骤和结果判定

均严格按照试剂盒说明书。

1.2 临床样品

浙江省杭州市某二元种猪场血清。

1.3 疫苗

猪伪狂犬病病毒 gE 缺失活疫苗 （Bartha-k61 株），

生产厂商为美国硕腾。

2 试验结果与分析

全猪场实行闭群管理、自繁自养，不从场外引种，

准备了 1 栋 600 m2 的后备猪舍。

2.1 猪场伪狂犬病的流行调查与调整

由表 1 可知，PRV-gE 抗体检测结果表明，猪场所

有的猪均有 PRV 感染，但感染率不高，都在 10.0%以

内；根据检测结果，猪场应立即淘汰 PRV-gE 抗体阳性

的种公猪、种母猪、后备种 猪及后备种 猪同栏 猪。

PRV-gB 抗体检测结果表明，种公猪、种母猪、哺乳前

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

期、保育中后期阳性率高，保护力合格；哺乳后期、保

育前期、生长猪、后备种猪 gB 抗体阳性率低，保护力

不合格。经分析，该猪场哺乳后期和保育前期猪的

PRV-gB 阳性率低的主要原因是母源抗体下降；生长猪

和后备猪的保护力不够的主要原因是免疫抗体的消长规

律。随即调整了伪狂犬病的免疫程序 （见表 2）。

由表 2 可看出，免疫程序调整后，增加了仔猪初生

后的滴鼻免疫，并且在保育和后备猪阶段各增加了 1 次

免疫。从 2020 年 4 月份开始执行调整后的免疫程序，

执行 5 个月后，再次进行 PRV 的净化检测。

2.2 猪场伪狂犬病感染阳性猪清除

2020 年 9 月对实施净化 PRV 的猪群进行 PRV-gB

阳性率检测，发现在哺乳后期、保育前期、生长猪、后

备种猪阶段 PRV-gB 阳性率有了大幅度上升，且都超过

了 90.0%，说明调整后的免疫程序是可行的。PRV-gE

检测结果显示，除了种公猪，每个阶段的猪都有不同程

度的野毒感染，说明仅调整免疫程序达不到净化 PRV 的

目的。经分析，淘汰 PRV-gE 阳性种母猪、后备种猪及

后备种猪同栏猪。同时，认为猪场各猪只间存在水平交

叉感染，需要加强猪场的生产管理。如加大种群淘汰力

度，确保净化顺利进行；加强后备猪的监测，确保

PRV-gE 100%阴性；严格实行“全进全出”，进出猪只

前后，对栏舍彻底清洗消毒；及时从正常猪中挑出病猪

并进行隔离治疗，死猪及时进行无害化处理；加强猪场

人员、物品和环境消毒，人员进入猪舍换衣换鞋；加强

表1表2020 3 不同剂量的益生菌制剂对仔猪血清免疫指标的影响 年3 月份对猪场PRV感染和疫苗的免疫效果进行调查

PRV-gE 抗体检测结果 PRV-gB 抗体检测结果

检测数/份 阳性数/份 阳性率/% 检测数/份 阳性数/份 阳性率/%

备注

种公猪 12 1 8.3 12 11 91.7 全部采样

种母猪 49 3 6.1 49 47 95.9 按 10%比率随机抽样

哺乳仔猪-1 38 3 7.9 38 36 94.7 0～7 日龄每窝 1 头

哺乳仔猪-2 43 4 9.3 43 34 79.1 8～14 日龄每窝 1 头

哺乳仔猪-3 42 3 7.1 42 25 59.5 15～21 日龄每窝 1 头

哺乳仔猪-4 39 3 7.7 39 23 59.0 22～28 日龄每窝 1 头（30 日龄断奶）

保育猪-1 58 5 8.6 58 28 48.3 30～39 日龄每栏 1 头

保育猪-2 66 6 9.1 66 62 93.9 40～49 日龄每栏 1 头

保育猪-3 67 5 7.5 67 64 95.5 50～59 日龄每栏 1 头

生长猪-1 20 1 5.0 20 17 85.0 15 周龄左右每栏 2 头

生长猪-2 20 1 5.0 20 14 70.0 20 周龄左右每栏 2 头

后备种猪 28 2 7.1 28 21 75.0 全部采样

表 3 不同剂量的益生菌制剂对仔猪血清免疫指标的影响 表 2 调整前后的猪伪狂犬疫苗免疫程序

调整前 调整后

日龄 疫苗类别 剂量 注射方式 日龄 疫苗类别 剂量 注射方式

备注

哺乳猪 0 弱毒苗 1 头份 滴鼻 增加

保育猪 30～35 弱毒苗 1 头份 肌肉注射 30～35 弱毒苗 1 头份 肌肉注射 不变

保育猪 70～75 弱毒苗 1 头份 肌肉注射 增加

生长猪 100～105 弱毒苗 1 头份 肌肉注射 100～105 弱毒苗 1 头份 肌肉注射 不变

后备种猪 130～140 弱毒苗 1 头份 肌肉注射 130～140 弱毒苗 1 头份 肌肉注射 不变

后备种猪 208～215 弱毒苗 2 头份 肌肉注射 增加

生产种公母猪 每年 1、5、8、

11 月各 1 次

弱毒苗 2 头份 肌肉注射

每年 1、5、8、

11 月各 1 次

弱毒苗 2 头份 肌肉注射 不变

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

猪只日常保健。此后，免疫程序保持不变，继续执行

PRV 的净化，6 月后猪场已出售大部分潜在带毒猪只，

并再次实施 PRV 感染阳性猪清除。至 2021 年 4 月，再

对猪群进行 PRV 抗体检测，发现各阶段猪只 PRV-gE

抗体阳性率均为 0，说明 PRV 阳性初步清除成功，猪只

间的水平传播得到有效控制。各阶段猪只 PRV-gB 抗体

阳性率也有了提高，免疫合格率在 95%以上，说明疫苗

免疫效果优秀。

2.3 猪场伪狂犬病的感染评估与净化维持

2021 年 5—12 月，对猪场开展 1 个猪生长周期的

抽样日常检测，从而来评估猪场 PRV 的感染情况。针对

种公猪分别于 5、7、9、11 月份每月抽检 2 次，每次抽

检比例 25%；种母猪群 6、8、10、12 月份每月抽检 8

次，每次抽检比例 6.25%；哺乳仔猪、保育猪、生长猪

每间隔 1 个月抽检 1 次，后备种猪群每月分 4 次抽检，

每次抽检比例 6.25%。监测结果发现，抽检全部猪群中

PRV-gE 抗体阳性率均为 0，整体猪群无野毒感染。

PRV-gB 抗体阳性率也维持在 95%以上，猪场免疫效果

维持优秀。表明该猪场 PRV 净化有效可行，达到预期效

果。

2022 年 2 月至 2023 年 1 月，对达到 PRV 净化标准

的猪群持续进行抽样监测，发现各猪只没有 PRV 野毒感

染。表明猪场 PRV 已经清除干净，净化成功。

3 小结

2011 年以来，猪伪狂犬病的流行在全国范围内呈上

升趋势，目前已成为严重危害养猪业的疫病之一[5,6]。

2018 年非洲猪瘟在我国发生以来，猪场都增强了生物安

全防控措施，也配备了检测实验室，这为猪伪狂犬病、

猪蓝耳病等的净化提供了条件[7-9]。庞超等[10]、吕素芳等[11]

研究发现猪伪狂犬的毒力因子是 gE 基因，我国实际生

猪养殖过程中多采用 PRV-gE 基因缺失疫苗预防猪伪狂

犬病。本次猪场均采用 PRV-gE 基因缺失疫苗，正常免

疫猪体内不会出现 gE 抗体，只有感染伪狂犬野毒的才

会出现 gE 抗体，因此，gB 抗体检测试剂盒联合 gE 抗

体检测试剂盒，能够区分疫苗免疫抗体和野毒抗体[12,13]。

此外，张志梅[14]、方伟等[15]研究表明，即使猪场免疫了

PRV-gE 缺失疫苗，不同场的 PRV 感染情况也有极大的

差异，这与免疫疫苗是否高效，以及免疫是否科学合理

有一定关系，所以在此次猪场猪伪狂犬病的净化过程

中，根据第 1 次调查结果果断修改了 PRV 的免疫程序。

在此次净化案例中可以得出，PRV 感染阳性场，在有效

使用 PRV-gE 缺失疫苗的情况下，持续通过免疫—检

测—淘汰—监测，仍然可以有效净化 PRV。

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猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.025

收稿日期：2023-06-01

基金项目：生猪产业前沿关键科学和技术研究项目 （2019xny-js044）

作者简介：麦金辉 （1996-），男，主要从事兽医临床微生物组学与生物技术研究

* 通信作者：谢小红 （1990-），女，主要从事动物疫病检测与动物保健研究

畜禽舍常用新型消毒产品及研究进展

麦金辉 1,2 张琳玉 1,2 王江萍 1,2 李 鑫 1,2 谢小红 1,2*

渊

1湖南农业大学动物医学院袁 湖南长沙 410128曰

2长沙绿叶生物科技有限公司袁 湖南长沙 410128冤

摘 要院 随着畜牧行业的现代化尧 集约化尧 规模化发展袁 伴随动物疫病的传播加快袁 如非洲猪瘟尧 猪流行性腹泻病等疫病遥

畜禽疾病防重于治尧 未病先防的养殖理念逐渐深入人心遥 畜禽舍的消毒管理成为养殖行业的一个常态化的工作遥 目前市面上

关于畜禽舍消毒的产品琳琅满目袁 本文通过对市面上畜禽舍常见的消毒产品进行比较分析袁 阐明常见消毒产品的一般性能尧

适用范围尧 作用机制以及特点等袁 以供养殖行业对消毒产品的选择进行参考遥

关键词院 畜禽舍曰 消毒剂曰 病原微生物曰 动物疫病

中图分类号院 S851.36 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0113-05

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Advances in Common and New Types of Disinfection Products in Livestock and

Poultry House

MAI Jinhui1,2, ZHANG Linyu1,2, WANG Jiangping1,2, LI Xin1,2, XIE Xiaohong1,2*

(

1College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China; 2Changsha Lvye Biotechnology Co., Ltd.,

Changsha 410128, China)

Abstract: With the modernization, intensification and large-scale development of the animal husbandry industry, the spread of animal

diseases had increased, such as African swine fever and porcine epidemic diarrhea in the pig industry. Animal disease prevention was

more important than treatment, and the breeding concept of preventing disease first had gradually gained popularity. The disinfection

management of livestock and poultry houses had become a normal work in the breeding industry. At present, there were a wide range of

product types for disinfection of livestock and poultry houses on the market. This paper compared and analyzed of common disinfection

product of livestock and poultry houses on the market, and clarified the general performance, application scope, action mechanism and

characteristic of common disinfection products, so as to provide reference for the selection of disinfection products in the breeding industry.

Key words: livestock and poultry house; disinfection; pathogenic microorganism; animal disease

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

我国是一个农业大国，畜禽养殖行业包括养猪业、

养牛业、养羊业和家禽养殖业等，随着现代农业的发展，

我国的养殖模式与规模通常分为集约化与规模化养殖、

家庭农场养殖以及合作社养殖等，近年来，我国的养殖

行业生物安全面临较为严峻的挑战，特别是动物疫情的

发生与传播。动物传染病具有发病快、传染率强、致死

率高等特点，如牛结核病、口蹄疫、羊布鲁氏菌病、家

禽马立克病、禽传染性喉气管病、猪流行性腹泻、非洲

猪瘟等，给我国的养殖行业造成了一定的经济损失。尤

其是近年来养猪业遭受了非洲猪瘟的肆虐，引起了猪价

的大幅波动，严重威胁人民的生活水平与身体健康。

在动物疫病防控中，除了疫苗与药物防控，对于畜

禽舍的消毒灭菌是必不可少的环节，特别是在日常生产

中，疫情发生后应及时扑杀畜禽、放空栏舍，并在复产

复养前对畜禽舍进行彻底的消杀，以便更好地进行生产

工作，避免疫情的再发生。因此，在对消毒产品的选择

及使用方面，需进行严格筛选和比较，本文通过对不同

种类的畜禽舍消毒产品进行分类比较，以供针对不同类

型、不同情况的畜禽舍消毒灭菌进行选择。

1 强碱类消毒剂

强碱类消毒剂包括氢氧化钠、生石灰等。氢氧化钠

消毒剂俗称烧碱，为片状或颗粒状，具有强腐蚀性，易

受有机物的影响。其可以使病原体的蛋白质变性与核酸

水解，破坏细菌的新陈代谢，进而杀灭病原。氢氧化钠

是目前能灭活非洲猪瘟病毒的最强化合物，一般用 2%

氢氧化钠溶液对畜禽舍进行冲洗或者喷洒可杀灭多种病

毒，但氢氧化钠容易对畜禽栏舍金属制品或运输车辆等

造成腐蚀，且容易对皮肤等造成灼伤[1]，使用时务必谨

慎小心。Kalmar 等[2]研究表明，氢氧化钠能有效灭活如

人类免疫缺陷病毒、PRV 和 ASFV 等脂质包膜病毒。生

石灰价格低廉，具有一定吸潮作用，将其溶于水后显碱

性，畜禽舍常将其配制成 1.0%～10.0%的溶液进行环境

消毒[3]，生石灰还具有吸湿性，也可以将其直接以干粉

的形式进行铺洒使用，可有效降低环境湿度，通常对圈

舍过道，养殖场外围，车辆通行道路等进行铺洒或动物

无害化处理时使用，能够有效杀灭病原微生物[4]。

2 强氧化物类消毒剂

强氧化类消毒剂具有较强的氧化性质，能够使有机

物氧化变性，如使病原微生物的蛋白质、酶、核酸等结

构变化或变性失活，从而杀灭病原微生物[5]。强氧化类

消毒剂包括过氧乙酸、过氧化氢、高锰酸钾和臭氧等[6]，

具有广谱杀菌的特点，使用后无残留无污染，但化学性

质稳定性较差，对金属有腐蚀性，易分解。过氧乙酸无

色，具有强烈刺激性气味，易挥发，形成蒸汽后遇明火

易发生燃烧或爆炸，具有一定的危险性，不宜长期储

存[7]。其可用于畜禽栏舍、饲料槽、非金属器具及手部

等消毒，0.1%～0.5%过氧乙酸的水溶液可用于喷洒、浸

泡和涂擦，另外可用于熏蒸和水的消毒[8]。但过氧乙酸

腐蚀性较强，对于畜禽具有一定的刺激性，是非洲猪瘟

病毒的高效消毒剂[9]。过氧化氢水溶液俗称双氧水，最

终分解产物为氧气和水，对环境无污染，在临床上也是

较为常见的消毒剂，浓度在 3%以下的过氧化氢可用于

环境消毒，6%以上浓度可用于灭菌，对病原微生物具有

较强的杀灭作用[10]。临床上一般用 3%的溶液进行创口

的清洗。同时过氧化氢具有强氧化性，浓度过高会造成

皮肤和组织的严重灼伤，如果长期接触可能会引起肺

脏、肝脏、肾脏等脏器的损伤[11]。高锰酸钾同样是一种

强氧化剂，呈黑紫色，具有金属光泽，能够有效杀灭细

菌、真菌和病毒，在酸性条件下能够明显提高杀菌作用。

0.01%～0.02%的高锰酸钾溶液可用于饮用水的消毒，

0.05%的高锰酸钾可用于饮水器、食槽等器具的浸泡消

毒，另外高锰酸钾溶液可用于黏膜的冲洗及伤口的冲

洗[12]。臭氧是具有鱼腥味的气体，可以通过紫外线灯照

射空气中的氧气生成臭氧，但臭氧极其不稳定，极易分

解，半衰期为 15～30 min，可用于密闭空间内的熏蒸消

毒，畜禽舍、舍内物品及水的消毒，可去除异味等，对

微生物具有较强的杀灭作用。

3 卤素类消毒剂

常用的卤素类消毒剂包括含氯消毒剂和含溴消毒

剂，卤素类消毒剂具有杀菌效果好、范围广、成本低廉

等特点，能使病原微生物中的蛋白质变性、氧化微生物

的活性基团，破坏其新陈代谢，从而使微生物死亡[13]。

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

市面上常见的卤素类消毒剂包括漂白粉、二氧化氯、氯

气、二氯异氰尿酸钠、二溴海因、溴氯海因等。

含氯消毒剂消毒能力强、用量少，对细菌、真菌、

病毒及寄生虫等都有杀灭作用。漂白粉是较为常见的含

氯消毒剂，主要成分是次氯酸钙，为灰白色粉末或颗粒

状，易吸潮分解，有明显的氯臭，常用于栏舍地面、粪

池及污水的消毒使用，作用浓度为 2～5 g/L，同时可用

于饮水消毒，使用浓度为 3～20 mg/L，但其稳定性较

差，易受光、热的影响而分解。

目前较为常用的含氯消毒剂为二氧化氯，其杀菌能

力是氯气的 3～5 倍，世界卫生组织将其列为 A1 级高效

安全消毒剂，二氧化氯的有效含氯量为 263%，作用机

理是释放新生态氧和次氯酸根离子，具有强氧化性，二

氧化氯无致癌、致畸、致突变效应，消毒时也不产生有

毒物质，对人畜无刺激，常应用于畜禽活体、饲料消毒

保鲜、畜禽设备、栏舍空气的消毒及除臭等，使用浓度

为 20～100 mg/L[14]。由于其安全高效，同时正逐步代替

氯气被自来水厂用于饮用水消毒，常用浓度为 0.1～2.0

mg/L。二氧化氯极易溶于水，不易发生水解作用，能够

与水中的含醛基、双键等有机物和还原态铁、锰、硫化

物等无机物发生强氧化反应[15]，此外二氧化氯也被广泛

用于医用消毒领域，其对临床上常见感染菌具有极好的

杀灭效果。浓度为 50 mg/L 时，作用 1 min，即可 100%

杀灭表皮葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、粪肠球菌、鲍

曼不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌

和阴沟肠杆菌等[8]，相同浓度作用 3 min，可 100%杀灭

金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和铜绿假单胞菌；浓度为

150 mg/L 时，作用 1 min，可 100%杀灭枯草杆菌黑色

变种芽孢[16]，Morino 等[17]研究证实了二氧化氯在一定湿

度下，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、包膜病毒和非

包膜病毒都有很好的杀灭作用。

4 醛类消毒剂

醛类消毒剂对病原微生物的杀灭机制主要是烷基化

作用，醛类消毒剂中的醛基分子可以与病原微生物中的

蛋白质和核酸中的氨基、巯基、羟基、羧基等进行反应，

破坏其生物分子的活性，进而表现出强有力的杀菌作用[18]。

甲醛是最早使用的醛类消毒剂，其消毒时使用的浓度

为 35%～40%的水溶液 （又称福尔马林），无色透明液体，

易挥发，常用于畜禽舍、密闭栏舍等的熏蒸消毒[19]。福尔

马林与高锰酸钾和水按 2∶1∶1 混合使用可快速产生大

量的热量，使甲醛以气体的形式挥发，扩散于空气中，

空气最适湿度为 60%～90%时，甲醛可使病原微生物的

蛋白质变性凝固和溶解脂类，达到消毒效果，其消毒作

用时间一般为 24 h，具有消毒效果好，成本低廉等优

点，但具有强烈的刺激性气味，长期接触可导致明显的

毒性副作用，并且会诱发癌症，对机体产生损伤，具有

一定的危险性。

国际食品安全及公共卫生组织认为，戊二醛是常用

单一成分消毒剂中消毒能力最强的一类，成为化学消毒

剂发展史上的第三个里程碑[9]。戊二醛是带有刺激性气

味的油状液体，具有一定的毒性，相比于甲醛，其刺激

性、致癌性、对金属的腐蚀性较小，受有机物的影响较

小。可杀灭细菌繁殖体、细菌芽孢、非洲猪瘟病毒等病

原微生物，其杀菌效果是甲醛的 10 倍，是醛类消毒剂

中杀菌效果最好，且对非洲猪瘟病毒最有效的消毒剂。

在 pH 值为 4.0～9.0 之间，随着 pH 值的上升，杀菌作

用效果不断增强[20]，当 pH 值大于 9.0 时，戊二醛发生

聚合，杀菌作用迅速消失。目前市面上有碱性戊二醛和

酸性强化戊二醛 2 种消毒剂，主要用于器物的浸泡消

毒，碱性戊二醛对芽孢杀灭作用较强[19]，但其只能储存

2 周，不便于长时间的存放与运输，酸性强化戊二醛聚

合作用较慢，稳定性较强，可室温存放 18 个月。

5 新型纳米材料消毒剂

纳米抗菌材料是一类具备抑菌性能的新型材料，是

在纳米技术出现后，将抗菌剂通过一定的方法和技术制

备成纳米级抗菌剂，再与抗菌载体通过一定的方法和技

术制备而成的具有抗菌功能的材料。纳米材料结构单元

的尺度在 1～100 nm 之间，属于微观系统，与宏观系统

物质相比，显示出特异的性质，具有表面效应、小尺寸

效应、宏观量子隧道效应等。这些特性也就决定了纳米

材料在各领域的广泛应用，例如在药物递送、医疗器械、

环境治理和电磁材料等方面。纳米科技从 20 世纪发展

至今，从最初的单一材料到如今由各种单一材料组合而

成的多维的具有纳米结构的体系，这些复合材料也具备

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

115

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

了更优异的性能。

研制和利用抗菌材料来抑制和杀灭有害细菌是提高

畜禽健康养殖水平的一个重要方面。传统的抗菌材料，

如抗生素、季铵盐等不仅会导致微生物的抗性，还会造

成严重的环境污染。纳米材料具有超强的抗菌性能，作

用效果持久，不易诱发细菌耐药性，有望成为一种新型

畜禽舍抗菌材料。在众多金属及其氧化物纳米粒子中，

银纳米颗粒抗微生物效果最好，研究也最为广泛。纳米

银作为一种新型高效无机抗菌剂兼具了催化和抗菌双重

性能[21-25]，可以杀灭大多数致病微生物，包括细菌、真

菌和病毒[26,27]。纳米银的抗菌机理主要有以下 3 个方面：

首先是与病原体表面膜蛋白相互作用，破坏病原体的被

膜结构，使病原体裂解死亡；其次是进入病原体内部与

呼吸链上的蛋白 （巯基、氨基等） 结合，破坏呼吸链，

阻断病原体新陈代谢；另外，进入细胞内部的纳米银与

病原体 DNA 相互作用，破坏 DNA 结构并抑制其复制过

程，影响病原体增殖过程[28-31]。纳米银独特的杀菌机制，

使得纳米银在很低的浓度下就可以迅速杀灭病原体，使

其失去繁殖能力从而无法产生下一代。因此，到目前为

止，还没有任何微生物对纳米银有很好的抵抗力[32]。

纳米银作为一种新型的广谱抗菌剂，目前已在生物

医药、纺织材料、建筑材料以及生活用品等多个领域得

到了广泛的应用[33]。近些年来，不少研究者将纳米银材

料用于水产养殖病害防治中。魏亚楠等[34]制备的纳米银 /

聚乙烯醇复合物对鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈

维氏弧菌、灿烂弧菌及点状气单胞菌等 6 种典型的水产

病原菌均有显著的抑菌效果。刘小莉等[35]研究证明纳米

银对普罗威登斯菌 XLX5、变形杆菌 BY-2、摩根氏菌

JY-1、副溶血性弧菌 VP1 等 4 种水产腐败菌的生长均

表现出显著的抑制作用。封琦等[36]以水产病原菌迟缓爱

德华氏菌和嗜水气单胞菌为研究对象，发现纳米银材料

对水产病原菌具有明显抗菌效果。这些研究预示着纳米

银材料可以作为一种新型抗菌剂，逐步替代抗生素或化

学消毒成分，随着制造成本的降低，同时应用于水产及

畜禽养殖行业。

6 小结

畜禽舍的消毒是贯彻预防为主的基本措施，特别是

非洲猪瘟病毒等在近年来对我国养猪行业的威胁，当前

并无安全、有效的疫苗和药物用于防控该病，提高猪场

生物安全防控级别是抵御非洲猪瘟最有效的手段。当

前，畜禽舍的消毒等生物安全防控工作成为养殖行业普

遍关注的焦点，并演变成了日常规范工作之一，正确选

择和使用高效、安全及有效的消毒产品是疫病有效防控

的基本保障，同时动保行业为了迎合市场不同需求，开

发新型高效安全的消毒产品也是发展所需。

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猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

117

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.026

收稿日期：2023-07-03

作者简介：黄标敏（1967-），福建新罗人，本科，高级畜牧师，主要从事畜牧兽医技术推广工作

生猪运输车辆洗消中心建设和

消杀技术的实践和体会

黄标敏

渊福建省龙岩市新罗区动物疫病预防控制中心袁 福建龙岩 364000冤

摘 要院 生猪感染非洲猪瘟病毒后死亡率极高袁 非洲猪瘟是危害生猪生产并对猪场造成重大经济损失的头号生猪疫病袁 自

2018 年非洲猪瘟病毒传入我国后袁 我国就有31 个省份发生了非洲猪瘟袁 且已形成一定的污染面袁 生猪运输车辆被污染的

概率较大遥 当前袁 在非洲猪瘟无疫苗可免疫防控条件下袁 选择有自然屏障的种猪场养殖区域建设无疫小区 渊无疫场冤袁 做好

野人尧 车尧 猪尧 肉尧 料冶 5个重点环节生物安全防护措施是成功将疫情 野拒之门外冶 的关键袁 本文阐述了无疫小区 渊无疫场冤

用车环节的防护措施袁 分析了生猪运输车辆洗消中心建设和消杀技术应用及存在的问题袁 并提出对策建议遥

关键词院 生猪曰 运输曰 洗消中心曰 建设消杀曰 技术应用

中图分类号院 S828曰S858.28 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0118-04

开放科学渊资源服务冤标识码渊OSID冤袁扫一扫袁了解文章更多内容

洗消中心建设的意义在于预防传染源进入养殖场，

实现控制传染病 3 要素，即控制传染源、切断传播途

径、保护易感动物。养殖场生物安全管理由内外 2 方面

组成[1,2]，在非洲猪瘟疫病防控无疫苗可控情况下，做好

“人、车、猪、肉、料”5 个重点环节生物安全防护措施

是成功将疫情拒之门外的关键。车辆环节防护措施中，

加强生猪运输车辆洗消中心建设和洗消技术应用是彻底

将非洲猪瘟病毒阻断在猪场外的关键要素[3]。

1 建设技术

1.1 洗消中心的选址

二级洗消中心建设应选在无疫小区 （无疫场）、片区

的净区，有足够的水资源和三相电资源，确保洗消中心

水电供应，距离无害化处理厂、屠宰场、养殖场等高风

险区不低于 5 km；洗消中心距离农村集市或饲料厂等地

2 km 以上，距离居民区 1 km 以上；进出洗消站的道路

不经过村庄，做到方便大车进出；洗消中心到各养殖场

的路线应确保安全，避免经过生物安全高危路段。

1.2 洗消流程设计

车辆经一级洗消中心预清洗后，从二级洗消中心入

口的消毒池进入，污区停车场停放。司乘人员在人员洗

消房洗消，车辆由工作人员从洗消房前门导入洗消房清

洗消毒，静置沥干，从洗消房后门移入烘干房烘干，停

入净区停车场。由司乘人员驾驶车辆从洗消中心出口驶

出，前往猪场烘干房烘干 （三级洗消中心） 后装运生猪。

1.3 建设标准

二级洗消中心总建筑使用面积应不低于 200 m2，设

计车辆洗消房和烘干房面积均不低于 70 m2，洗消房配

备 70℃以上水加热设备 1 套 （台）、高压冲洗设备 1 套

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

118

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

（台） 和消毒液喷洒设备 1 套 （台） [4]，烘干房配备加热

保温设备 1 套 （台），室内中心空气温度应于 10 min 内

达到 70℃，实现车辆的高压清洗、彻底消毒和高温烘干。

2 消杀技术

消毒即杀死病原微生物[5,6]，生猪运输车辆在洗消中

心进行消杀，包含车辆在洗消房清洗消毒和烘干房烘

干。附属消杀设施包含办公生活区、动力站、硬化路面、

废水处理区、衣物清洗干燥间、污区停车场及净区停车

场等[7]。

2.1 生猪运输车辆清洗消毒和烘干应用技术探讨

2.1.1 清洗顺序

驾驶员将车辆驾驶到洗消房进行清洗。车辆按先内

后外、从上到下、从前到后的顺序进行污物清洁。车辆

内部清洗驾驶室内泥土、粉尘、油污和杂物、擦拭方向

盘和挡风玻璃。车箱内部用清水冲洗掉车内的泥土、粉

尘、油污和杂物；车内物品用过硫酸氢钾消毒溶液擦拭

或冲洗。车辆外部清洗先低压打湿车厢及外表面，水浸

润 10 min，底盘按照从前到后进行清洗，然后按照从前

到后的顺序高压冲洗车辆。清洗剂的水压要保证在 13

MPa 以上并使用 70℃热水冲洗。用清水自上而下冲洗

掉车体上的泥土、粉尘、油污和杂物，尤其注意清洗车

辆底盘的各个角落、挡泥板、驾驶台以及车轮纹沟等容

易积存泥污的部位，清洗车轮时应将车辆作前后移动，

至清洗干净；冲洗过后对全车喷洒泡沫，全覆盖浸润 15

min。然后按照从前到后的顺序再高压冲洗后停车沥水。

2.1.2 消毒原则

轮胎消毒时，使车辆缓慢驶过含 3%烧碱液的消毒

池；车辆内部消毒时，驾驶室、车内物品、驾驶员外表

等用过硫酸氢钾消毒剂进行喷雾消毒；脚踏板用含 3%

烧碱的消毒液进行消毒；车箱内部按照从前到后的顺序

全面喷洒消毒剂消毒，消毒剂用过硫酸氢钾、戊二醛、

次氯酸钠等，消毒剂静置 30 min 以上。车辆外部消毒，

按照从前到后的顺序全面喷洒消毒剂，消毒剂用过硫酸

氢钾、戊二醛、次氯酸钠等，静置作用有效时间 30 min

以上[8]。

2.1.3 烘干

清洗消毒后的车辆按规定路线驶入高温烘干房内，

在 70℃的条件下烘干 30 min。

2.1.4 停放

把烘干后的车辆停放在净区停车场。清洗车辆自进入

洗消中心入口到驶出洗消中心出口，只能保持单向移动。

2.2 办公生活区消毒技术应用探讨[9]

2.2.1 有人情况下

加强通风，特别是自然风的通风对流，保持室内空

气与室外空气的交换，自然通风不良则必须安装足够的

通风设施 （排气扇）。用过硫酸氢钾、含氯消毒剂等进行

喷雾，用量为 20 mL/m3，作用时长为 30 min。

2.2.2 无人情况下

消毒时关闭门窗，使用雾化消毒机进行喷雾[10]，使

用过硫酸氢钾消毒剂，用量为 20 mL/m3，作用时长为

30 min；或 0.5%的过氧乙酸喷雾，用量为 20 mL/m3，

作用时长为 30 min；严格按照消毒药物使用浓度、使用

量及消毒作用时间操作，保证消毒效果。每天应消毒 1

次，消毒时腾空房间，密闭门窗进行喷雾，喷雾完毕，

保证消毒作用时间，方能开门窗通风。

2.3 地面和物体表面消毒技术应用探讨

用过硫酸氢钾消毒剂喷洒 （拖地） 或用 0.1%过氧乙

酸拖地或用 0.2%过氧乙酸喷洒方法进行消毒；桌子、椅

子、凳子、床头柜、门把手等可用上述消毒液擦拭消毒。

2.3.1 人员使用物品

洗消中心人员使用的被服、工具、隔离衣、帽子、

手套、鞋套、便器、浴盆及其他生活垃圾定时消毒及时

处理[11]。生活垃圾要用双层垃圾袋盛装及时有效处理，

存放容器必须加盖，避免可能的污染。

2.3.2 卫生间消毒

用足量过硫酸氢钾消毒液，对排泄物、分泌物进行

及时消毒，作用时间 30 min。

2.4 消毒药剂的选择应用探讨[12,13]

2.4.1 过硫酸氢钾复合物

过硫酸氢钾复合物可用于运输车辆、办公房、洗消

房、烘干房、衣物清洗干燥间、硬化路面、污区停车场、

净区停车场、器具、皮肤黏膜等的消毒，配比 1∶200，

现配现用；过硫酸氢钾复合物用于废水处理区消毒，配比

1∶1 000，不得与碱类物质合并使用，包装不得乱丢弃。

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

119

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

2.4.2 戊二醛

选择戊二醛用于环境及器具消毒，配比 2%，方法

为在通风良好处使用，注意个人防护，现配现用，操作

人员对醛过敏者禁用，若不慎接触，应立即用清水连续

冲洗。

2.4.3 福尔马林

选择福尔马林 （40%甲醛） 用于空置环境熏蒸及喷

洒消毒，配比 25 mL/m3 加水 20 mL，方法为加热蒸发

10 h，要求舍温≥20℃、相对湿度≥60%。

2.4.4 氢氧化钠

选择氢氧化钠 （火碱） 用于空置环境消毒，配比

2%，方法为喷洒，有腐蚀性，消毒后 6～12 h 应冲洗干

净注意人员防护。

2.4.5 聚维酮碘

选择聚维酮碘用于环境及器具、皮肤黏膜消毒，配比

0.5%～2%，方法为现配现用，避光保存，褪色即失效。

3 分析与讨论

福建省龙岩市新罗区是全国生猪养殖大县，2022 年

出栏生猪 87 万头，为保证生猪健康生产，动员养猪场、

企业建成了车辆三级洗消中心和生猪运输车辆洗消中心

15 个，福建省农业农村厅“先建后补”补助养殖企业建

设二级洗消中心 6 个。 《新罗区 2021 年第二批生猪调

出大县奖励资金分配使用公示》 中分配 230 万元，发放

给了 7 个洗消中心和 8 个涉猪镇，用于消毒剂和消毒机

的购买，并推进了新罗区运输车辆的清洗、消杀、烘干

等规范运行。

统计 2019—2022 年新罗区生猪运输车辆洗消中心

车辆洗消实践成果，新罗区有 4 个生猪运输车辆洗消中

心，覆盖的片区养猪场可以完全免受非洲猪瘟病毒侵

害，一方面是车辆洗消中心分 3 级运行，一级洗消中心

预清洗，委托商业和一般洗车清洗点开展；二级洗消中

心采用规范洗消和烘干；三级洗消中心采用烘干房烘

干。另一方面是片区养猪场二级车辆洗消中心选址距离

猪场均大于 5 km，建设按规范流程布局，洗消中心工作

人员责任心强，能够严格执行运输生猪车辆消杀技术和

消毒剂配比，做到管理规范有序，在洗消中心消毒好的

车辆到猪场运载生猪时，能够再次用猪场烘干房烘干后

装运生猪，有效消除了运猪车携带非洲猪瘟病原问题[14]。

4 思考与建议

4.1 存在的问题

目前，新罗区的车辆洗消中心还存在以下 2 方面问

题，一是部分二级车辆洗消中心，没有做到净污区分开，

洗消和烘干不到位。二是车辆洗消中心人员管理、车辆

管理、物资管理和现场管理暂无规范运行指导意见可执

行，工作人员对消毒清洗烘干流程执行存在漏洞，工作

不到位。

4.2 建议

4.2.1 强化科技支撑

积极发挥科研院所的技术优势，帮助养殖企业引进

可以推动生猪运输车辆洗消中心升级的智能化设施设

备、消毒工艺、过程管控等，在实践过程中不断探索、

修正完善，助力生猪车辆洗消向程序化、无人化、现代

化方向发展。

4.2.2 加大政策扶持

种猪稳定保障供应是一个地区生猪生产的关键，为

保护种猪生产有一方净土，出台扶持种猪无疫场、无疫

小区片区建设生猪运输车辆洗消中心，在选址布局、用

地审批、标准化建设等方面予以支持并补助；将车辆洗

消中心的机械和设备列入农机新装备补助项目中，助力

构建并保持片区防控非洲猪瘟等主要疫病小区域环境净

化，确保种猪种源稳定安全。

4.2.3 推进政企合作

推广生猪运输车辆洗消中心建设和消杀技术经验交

流，政府制订生猪运输车辆洗消中心建设和消杀技术强

制规范标准或指导意见。加强对洗消中心的管理，一是

人员管理；洗消中心设专人管理，负责洗消中心所有事

宜，同时作为车辆洗消烘干的主要检查验收人。工作人

员在洗消中心必须遵循单向流动原则，按照“人员洗

澡→更换衣服鞋子→净区宿舍”的顺序从灰区进入净

区，确保进入净区的人员符合生物安全要求。二是车辆

管理；无关车辆全部停放在污区停车场，严禁驶入灰区

和净区；运猪车辆在洗消中心严格遵守单向流动原则。

三是物资管理；进入洗消中心的物资，从物资间灰区门

口进入，在物资间进行熏蒸消毒 24 h 以上，从净区门口

渊下转第124页冤

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

120

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.027

收稿日期：2023-04-21

作者简介：周艳红 （1980-），女，硕士，高级兽医师，主要从事动物疾病诊断、防控工作

浅谈中小养殖场生物安全管理

周艳红

渊沈阳市动物疫病预防控制中心袁 辽宁沈阳 110034冤

摘 要院 近年来袁 随着非洲猪瘟等重大动物疫情的发生和流行袁 生物安全的重要性日益引起人们的关注袁 有效的生物安全措

施不仅有助于提高养殖企业的生产效益袁 同时也是动物和人民健康的重要保障遥 本文就目前我国养殖业生物安全现状进行分

析袁 对中小型养殖场提出了生物安全管理的相关措施及建议袁 希望能为中小型养殖企业进行生物安全防控提供参考遥

关键词院 生猪养殖曰 生物安全曰 疫病防控曰 对策

中图分类号院 S828曰S815 文献标识码院 B 文章编号院 1673-4645(2023)06-0121-04

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在养殖业的发展过程中，动物疫病一直是危害养殖业

发展的重要因素，疫病不仅是造成养殖业重大经济损失的

“罪魁祸首”，同时也是人畜共患病发生的潜在威胁。近年

来，随着非洲猪瘟、猪流行性腹泻等重大动物疫情和外来

病的发生和流行，使人们对生物安全有了更高的理解和认

识，而养殖场中生物安全管理的地位更加凸显[1]，做好养殖

场的生物安全管理是预防和控制动物疫情发生发展、保障

人民生命财产安全、促进畜牧业良性健康发展的重要措施。

员 生物安全的概念

在 2021 年 4 月实施的 《生物安全法》 中指出，生

物安全是指国家通过生物技术措施有效防范和应对危险

生物因子及相关因素威胁的方式，生物技术的稳定健康

发展，能够保障人民生命健康和生态系统相对处于没有

危险和不受威胁的状态。一般是指由现代生物技术开发

和应用所能造成的对生态环境和人体健康产生的潜在威

胁，及对其所采取的一系列有效预防和控制措施[2]，在

养殖行业中通常理解为预防、控制动物疫病的发生和传

播，保护动物、人类和环境健康的措施。

2 我国养殖业的生物安全现状

近年来，我国养殖业发展有了很大提高，集约化、机

械化养殖规模逐步扩大，我国正由畜牧大国向畜牧强国迈

进[3]。众所周知，规模化养殖为现代畜牧业发展、农村经

济、“菜篮子”和农民增产增收作出了巨大贡献，在我国

全面实施乡村振兴背景下，如何让畜牧业健康发展，为乡

村振兴作贡献，已成为养殖业需要研究的重要课题。在乡

村振兴、健康养殖的大背景下，做好养殖业的生物安全是

保障畜牧业良好发展的重要前提。目前我国养猪业水平参

差不齐，处于大型养殖集团、中小型养殖企业、散养户并

存阶段，受市场波动影响，养殖业环境复杂多变，给养殖

市场带来一系列的不确定性，严重制约我国养殖业的发展。

2.1 动物疫病复杂多样

生物安全的目的是防止疫病的发生和流行，给养殖

业创造一个健康的养殖环境。但目前我国动物养殖疫病

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

121

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

防控形势并不乐观，新发病、外来病增多，病原变异株、

超强毒株与高致病力毒株不断出现，病原耐药性增强，

动物发病多呈隐性混合感染，为疫病防控增加了难度[4,5]。

2.2 中小型养殖场和个体养殖户疫病防控能力弱

大型现代化规模养殖场拥有科学合理的布局规划和

先进的设施设备，以及专业的养殖技术和规范的管理理

念，生物安全防控水平较高。而中小型养殖场和散养户受

设施条件和资金条件限制，存在养殖技术水平较低，管理

不规范，抗风险能力弱等问题，同时由于对疫病防控能力

低，粪污处理设施技术缺乏，造成养殖场周围环境污染

严重，易形成永久性疫源地，导致疫病防控形势严峻[6,7]。

2.3 基层动物疫病防控体系不健全

近几年，尽管农业农村部多次发文，要求加强基层

动植物疫病防控体系建设，但由于政府财力、人员编制

及工作性质等多种因素影响，基层从事动物疫病防控工

作的人员逐年减少，有的地区从业人员老龄化严重，编

制缩减，加之养殖主体的多元化和分散性，防疫工作量

大、面广，任务繁重，疫病防控形势复杂、难度大，成

为制约动物疫病防控工作的难题。

3 生物安全管理措施

传染病的发生主要包括 3 个要素，即传染源、传播

途径和易感动物。生物安全就是用来消灭传染源，切断

传播途径所采取的措施。也就是提高从外部减少或阻断

病原传入的防范手段，加强养殖场内部员工活动和动物

的管理，以阻止病原体在动物中的传播。规模化养殖使

猪群聚集，养殖密度高，同时中小型养殖企业的生产管

理粗放，卫生条件差、防范意识淡薄、消毒措施不到位

等问题，为病原微生物的孳生和传播提供了有利条件。

3.1 建立物理屏障

建立物理屏障的目的就是尽可能地减少外部动物或

病原携带者的入侵。包括科学的布局分区、防护隔离带，

防鼠、防蚊虫、野鸟措施等[3,7]。

3.1.1 外部隔离设施

养殖场场区采取封闭式管理，与外部环境有清晰的

划分界限，在场区周围建立围墙或简易网状隔离设施，

避免外部动物闯入场区。进入养殖场的门口处要设置车

辆消毒池、人员消毒通道，减少外部病原的带入。

3.1.2 内部严格分区设置

场区内区分生产区、生活区、隔离区，不同区域间

隔一定距离，利用隔离带或建造围墙隔开，便于生产管

理和疾病预防。生产区作为养殖场的主要组成，应设在

生活区的下风口和隔离区的上风口，可以根据养殖动物

进行细分，如养殖舍、配种室、兽医室、药房、消毒舍、

料库等。隔离区是养殖场生物安全管理的主要部分，应

设置在远离生产区或场区的角落，尽量在围墙附近，需

设置动物隔离区、粪污处理区和病死动物处理区等，便

于从外部操作，及时进行消毒，从而减少病原的引入。

在废弃物集中堆积的场地，加设防护网防止鸟类、蚊蝇

等携带病原传播。在饲料存放处和养殖区域特别是猪、

禽养殖场所，要做好料库、圈舍围墙、地面硬化，严防

老鼠进入。场区内与外界应有专用道路相连，场区内设

立清洁通道和污染通道，两者严格分开，不得交叉、混

用。人员、饲料等进出走洁净通道，动物、粪便、垫料

及废弃物运输走污染通道[8-10]。

3.2 人员尧 物资管理

人员和物资流动性大、与外界接触多，成为引入病

原的重要途径，养殖场从业人员、采购的物资、饲料运

输、动物转运等都是风险因素[11]。对于生活、生产物资

要严格执行消毒措施，在进场区门口或卸料台实施熏蒸

消毒或喷雾消毒，严格限制访客进入生产区。同时制定

完善的规章制度，限制人员流动，必须外出人员要做好

消毒、隔离措施，没有进行消毒的物品不能带入场区。

有条件的养殖场可配备更衣区和人员衣物洗涤消毒区，

人员工作时进出生产区要进行衣物更换、消毒，工作时

穿专用工作服，佩戴口罩、手套，特别是在饲喂、输精、

疫苗免疫等技术操作过程中严格进行无菌操作，避免疫

病感染和传播[12]。

3.3 车辆管理

养殖场运输车辆主要分为 2 类，一类是外部来源的

生活采购用车辆、动物及动物产品收购车辆、饲料运输

车辆和外来访客车辆等。这些车辆主要在场区外围活

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

122

China Swine Industry

2023 年 第 6 期

动，与外界接触较多，特别是动物及动物产品收购车辆

和饲料运输车辆经常穿梭在不同养殖场之间，容易引起

病原交叉传播，这些车辆应禁止进入场区，同时在外部

设置专用停车转运点，严格进行消毒，避免将病原引入

场区。另一类是在场区内部活动的车辆，包括饲料转运

车，动物及产品售卖转运车、粪污转运车等，有条件的

场尽量做到专车专用，路线固定，每次使用后对场地和

车辆进行消毒。若必须混用车辆的情况下，每次用完后

要进行车辆彻底清理、消毒后再做他用，防止将污染物

带入生产区引起动物发病[13,14]。

3.4 粪污尧 病死动物处理

粪便、污水、病死动物、医疗废弃物往往携带大量

的病原体，也是蚊蝇孳生的主要地点，易成为重要的传

染源，因此，要加强养殖废弃物无害化处理，在场区内

设置污水专用排水沟，收集圈舍消毒污水、车辆清洁污

水到污水处理池，每日对污水进行集中消毒。设立粪便

堆积区，对粪便进行堆积发酵和消毒。引入发酵罐或采

取深埋、焚烧等方式对医疗垃圾、病死动物进行无害化

处理，确保猪场废弃物不会变成传染源[15]。

3.5 建立完善的制度体系

对于企业来说，完善的规章制度是成功运营的基本

保障，中小型养殖企业一般工人较少或是家族经营，规

章制度并不完善，管理理念与大型养殖集团存在差异。

要想做好生物安全，需要提升员工规范意识，进行相关

培训及制度的制定[15]。

3.5.1 人员管理制度

人员的流动是与外界接触造成病毒传播的重要途

径，因此，养殖场要制定严格的人员管理和进出场制

度，饲养人员实施驻场管理，严禁随意离开场区，外出

实施请假制度，饲养管理人员进场必须经过消毒、淋

浴、更换场区的工作服和工作靴，有条件的场区进行人

员隔离观察，隔离期结束后才能进入生产区。管理制度

需要切实落实，无论是普通员工还是管理者，只要进场

就要执行这一制度，避免引入病原。

3.5.2 消毒制度

消毒是消灭传染源的最有效途径，也是保证养殖场

生物安全的重要措施，因此，养殖场要制定全面有效的

消毒制度。包括进出场人员、车辆、饲料、垫料、器械、

员工生活物品的进场消毒制度；圈舍消毒制度，场所环

境消毒制度、使用器械工具消毒制度等。

3.5.3 无害化处理制度

病死动物、医疗废弃物、粪污是养殖场重要的传染

源，养殖场应该设置无害化处理设施或场地，集中收集

处理，病死动物暂存设施设备应该密闭，防水、防鼠、

防蚊蝇，避免污染源外泄。同时对于生物用品容器、使

用器械、防护用品、过期药品等严禁随意乱扔，应对病

死动物尸体及污染物进行集中消毒、深埋、焚烧处理，

有条件的可送专业医疗废弃物处理机构处置。

3.5.4 疫苗免疫制度

疫苗免疫是有效防范动物疫病的手段，因此，一套

科学合理的疫苗免疫方案是养殖场做好生物安全的必备

条件，养殖过程中严格开展疫苗选购、储存和使用，按

要求更换免疫器械，操作人员要经过正规培训，使用正

确免疫方法，严格执行免疫程序，筑牢动物疫病防护墙。

3.5.5 引种制度

对于病原阴性场，要做好引种净化，有条件的场最好

自繁自养，尽量做到“全进全出”，严格控制疫病的引入[16]。

引种进场后实施隔离观察，确认健康后再进入饲养区。

4 结语

生物安全已成为畜牧业生产的一个基本要素，特别

是在集约化养殖生产中，避免引入新的病原体并限制其

传播将有助于提高养殖场的生产力。生物安全要结合养

殖场区实际情况，因地制宜不断完善改进并严格执行，

才能降低疾病的发生风险，控制疫情的发生。因此，中

小型养殖场在应对复杂的疫病流行和市场竞争压力下，

提高养殖场生物安全的控制水平是其必要的生存条件。

参考文献

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猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

渊上接第 120 页冤

取出使用。四是现场规范管理；洗消中心严格分污区、

灰区、净区管理，根据现场实际结合生物安全的要求，

制定详细的洗消中心现场规范化管理制度并严格执行，

组织专人定期进行检查评审。

5 总结

二级车辆洗消中心的建立是为了对进入猪场的车辆

进行清洗、消毒和烘干，以及对随车人员和物品的清洗

和消毒，快速、高效杀灭绝大多数病菌；但是洗消中心

的管理却是真正发挥安全防控作用的保障，只有按照标

准建设洗消中心，按照规范的操作程序进行消毒，消毒

后严格检查，开展洗消效果监测评价[15]才能形成以猪场

为核心、以洗消中心为屏障的多层生物安全防护圈，切

实有效地保证猪场安全。

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2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.028

浅析基层兽医

实验室人员工作中存在的问题

李 赟 杨旭华 李铁全 田 瑾 白利鹏

渊太原市动物防疫检疫中心袁 山西太原 230027冤

摘 要院 基层兽医实验室是基层开展动物疫病防控技术的支撑部门袁 对疫情的预警有着重要意义遥 试验人员规范开展试验相

关工作是高标准完成试验的核心环节遥 本文列举了当前基层实验室人员在试验开展过程中涉及的不规范操作尧 生物安全意识

不足尧 报告记录不完善等各类问题袁 并指出了注意事项遥 结合发现的问题提出健全人员管理制度尧 提高人员专业化水平尧 强

化生物安全意识等建议袁 为基层兽医实验室高标准开展试验工作提供参考遥

关键词院 基层兽医曰 实验室曰 人员曰 试验操作曰 管理

中图分类号院 S851.63 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0125-04

开放科学渊资源服务冤标识码渊OSID冤袁扫一扫袁了解文章更多内容

收稿日期：2023-04-27

作者简介：李赟 （1982-），女，硕士，高级兽医师，研究方向为重大动物疫病防控及兽医实验室检测

Analysis of the Problems in the Work of Primary Veterinary Laboratory Personnel

LI Yun, YANG Xuhua, LI Tiequan, TIAN Jin, BAI Lipeng

（Taiyuan Animal Diease Prevention and Quarantine Center, Taiyuan 030027, China）

Abstract: Primary veterinary laboratories were the technical support department for animal disease prevention and control, and played

an important role in early warning of epidemics. The standardization of laboratory work by laboratory personnel was a key factor in completing testing work to a high standard. This article cited various problems encountered by current primary laboratory personnel in the

experimental process, such as non-standard experimental operations, insufficient biosafety awareness, and incomplete report records,

and pointed out relevant considerations. Based on these issues, suggestions made to improve personnel management systems, enhance personnel professionalism, and strengthen biosafety awareness, provided reference for high-standard laboratory work in primary

veterinary laboratories.

Key words: primary veterinary; laboratories; personnel; experimental operations; management

猪病防控 Swine Disease

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

基层兽医实验室在开展非洲猪瘟等动物疫病监测、

流行病学调查、疫情诊断等疫病防控中起着重要作用。

而实验室动物疫病检测工作具有专业性强，生物安全水

平高的特点。人员是实验室工作开展的基本要素，检测

工作的规范性、人员整体素质水平直接决定着检测结果

的准确性。基层实验室人员学历普遍不高，很多非专业

院校毕业，水平不扎实、试验中操作不严谨、无消毒灭

菌及自我保护意识，给实验室检测数据的输出及生物安

全带来极大隐患[1]。因此，加强实验室人员管理，建立

标准化试验流程，增加人员培训是提高实验室检测结果

准确、减少安全事件发生、保障实验室工作顺利开展的

基础。

1 存在的问题

1.1 样品试剂接收随意袁 保存方式不规范

大多基层实验室就收样环节无明确规程。首先未设

置接样岗位，无固定接样人员[2,3]；样品接收时不了解该

样品用于检测的项目，采集的样品是否符合文件或检测

要求；采样单是否填写完善，尤其是免疫背景，采样数

量，采样人员联系方式不核对。其次不检查样品；不核

实样品实际数量与采样单是否一致，样品编码是否准确

且具有唯一性；不检查样品是否存在管破裂、溢洒、污

染、霉变及是否溶血或采样量是否满足需求等问题。第

三点是样品的保存不符合要求，未根据检测项目开展时

间和样品类型分类保存；通常 3 d 内开展检测的样品均

可放置于 4℃环境。血清、各类拭子、组织样品、OP

液、精液等可冷冻保存。超出 3 d 检测的，可置于冷冻

环境，但全血、鸡蛋等样品不能冷冻[4]。同时要注意玻

璃制品不应冷冻，防止管壁冻裂样品溢出造成整体污

染。样品存放后不完善接样信息；样品保存过程中不规

划，随意冻融也是常见现象。在试剂的验收入库上，主

要体现在不注意试剂生产日期及有效期，保存温度不按

说明书执行。比如不同类型不同企业的抗原保存温度不

一致；核酸提取试剂盒存放温度不一致，有的需冷藏，

有的常温即可，试剂盒中蛋白酶需拿出单独 -18℃保存

等细节不注意。试剂保存温度不当、抗原等物质失活，

均导致试验无法开展。

1.2 试验操作仅凭经验袁 细节把控不严谨

一是不严格按照试验说明书操作，例如采用 ELISA

检测方法时，试验开始前包被板是否需要预洗；洗板时

次数、每孔加液量及是否需静置；显色剂 A 和 B 的加样

方式；加样后显色时的环境温度等细节均不按照规定操

作，造成非特异性反应增加或试验无果。稀释样品时，

忽略混匀步骤或次数随机，造成样品稀释倍数不准。二

是移液器枪头不及时更换，吸取同一液体时，基于不同

人员手法熟练程度不同，当无法做到悬空加样，碰触到

已添加样品孔时，未立刻更换吸头，造成后续整排孔污

染。三是加样顺序随机，如阴阳性对照品在整个样品添

加过程中，添加顺序形不成规程，建议 1 个实验室同类

试验布板及加样顺序做统一规定。四是 PCR 核酸检测

时，混样数量不结合检测样品背景及检测目的变化，而

是固定不变，造成混样基数过多，弱阳性检不出，或基

数较少试剂产生浪费。五是肉眼判定结果无第二人复

核，如虎红平板凝集试验，试管凝集试验和血凝 （抑制）

等试验，主观随意性大，不同人判定易造成不同结果。

同时还有人为操作随意的习惯影响检测准确性。如孵育

包被板时多板叠摞，温度感受不均；洗板后拍板不彻底，

或力气过大造成包被板液体残留或整排脱落，样品位置

混淆。

1.3 忽视试验环境温湿度袁 时间意识差

环境温湿度对试验结果的影响很大[5]，例如做血凝

（抑制） 试验，若不人为控制温度，冬天和夏天凝集反应

时间差异大，抗原抗体还未充分结合，就加入红细胞，

造成反应不充分；或为提高温度直接把凝集板放于空调

暖风直吹处、包被板不覆膜直接放培养箱，造成液体蒸

发严重，总之，应在试验期间保证整体或局部温湿度的

稳定，才能尽量减少对试验结果的影响。同时多项目同

时开展时，未做好规划，造成洗板机、酶标仪等多板需

同时使用，而仪器数量有限，导致包被板内物质因等待

机器，被动反应时间加长；虎红平板凝集试验，一次性

混合份数太多，造成判定结果时最先混合好的孔已过最

佳判定时间；血凝抑制试验一次性做数 10 个板，不卡

头尾板加样时间，造成每板反应时间把握不准，使反应

不充分或反应过度；基层实验室常规开展的试验人工操

猪病防控 Swine Disease

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

作步骤多，温湿度、时间不进行有效规划把控势必影响

结果。

1.4 设备使用不按规程袁 维护保养不及时

人员在操作仪器设备中使用的方法不科学，在移液

器等常用设备上形成暴力粗放型操作习惯。比如移液器

装配吸头时为安装牢固而猛烈撞击；高量程二档吸入液

体时速度过快，液体反冲进移液器造成设备污染；试验

完毕的移液器未调至最大量程[6]。离心机离心时不配平；

离心用玻璃管导致管壁破裂；离心完毕不及时消毒。洗

板机使用完毕不用蒸馏水冲洗，停用时间稍长，造成板

孔管堵塞。生物安全柜使用期间物品遮挡里外通风口，

导致风向乱流；高效过滤器不按规定时间更换[7]。诸如

此类操作均会造成设备读数不准或频繁故障，同时部分

实验室的仪器只使用不养护校准，设备精准度下降而不

知，造成试验结果误差增大或错误。

1.5 试验相关记录不完善袁 报告不规范

很多试验人员检测出结果后，简单记录报告主管部

门后完毕，不注重检测过程的原始痕迹保存。应该从接

样后任务下达、试验开展后设备的使用记录、原始图谱

数据、结果汇总、试验报告、样品留样记录等应形成本

实验室一套完整的管理体系[8]，均属人员工作的一部分，

也为今后追溯提供依据。同时试验人员出具报告不规

范，报告内容无检测依据、不填写使用的主要仪器设

备、不写判定标准、无三级签字、章证不完善等均是常

见现象。

1.6 生物安全意识不足袁 自我保护意识差

实验室人员生物安全意识直接影响自身健康和公共

卫生安全[9]。基层实验室人员在自身防护、试验安全操

作及环境消毒灭菌方面意识不足。一是表现在人员出入

实验室无屏障；试验期间手套口罩不能全程佩戴，破损

后不及时更换等。二是不规范的试验操作造成安全隐

患，如离心机使用期间管盖密封不严造成样品溢洒；应

在生物安全柜内的操作而直接在试验台进行；生物安全

柜不区分净区、污区，操作上空间交叉造成污染，样品

液体流入排风口不易清理；使用过的试剂敞口堆砌，

PCR 试验提取或扩增板未经消毒随意扔置，造成气溶胶

传播[10]。三是试验后做不到有效消毒，试验垃圾无专业

处理渠道是普遍现象。不能有效利用酒精、84 消毒液等

液体消毒剂进行局部清洁，未养成仪器设备定期消毒习

惯；同时 PCR 实验室不通风，不利于气溶胶扩散；工作

服及非一次性试验耗材长久不消毒清洗。

2 应采取的措施和建议

2.1 人员工作精准定位袁 严格执行实验室各项制

度规程

根据实验室人员数量，将接样、出具报告、不同类

试验的开展、仪器设备的维护管理、标准查新、档案管

理等工作细化至岗位个人，保证试验人员持证上岗。要

熟练掌握负责岗位的主要内容、相关操作和该岗位的风

险点，人数少的实验室可以 1 人多岗，总之专岗专人，

提高试验人员的责任心和使命感，制定考核标准，作为

年底考核依据。引导试验人员除关注试验结果外，还要

熟练掌握并执行实验室的各项制度和规程。包括样品接

收、存放和管理、试剂耗材的使用、不同试验操作、试

验结果的报告流程，尤其是仪器设备的使用维护、保养

和校准，制定制度并严格执行；要细化每项试验的标准

化操作流程。总之，有完整的标准化操作规程并严格执

行是试验成功的关键[11,12]。

2.2 持续开展人员专业培训袁 摒弃墨守成规的试

验习惯

基层人员流动性大，而兽医实验室检测技术专业性

强，要求人员短时间内掌握每一项试验的原理、每一步

所用试剂的目的，而不应只局限于流水线作业。一旦出

现问题，应有能力分析原因，找出问题所在。当今检测

技术更新很快，为保证试验方法的有效性和结果的准确

性，应制定详细的培训计划。试验人员要不断了解新检

测技术、掌握先进方法、完善试验步骤、规范操作流程；

掌握不同类试验的优缺点、敏感性和特异性。在老带新

的过程中，要吸收老一辈试验员的经验，但对长期错误

性操作方式或行为坚决改进。只有不断提升实验室全体

人员的综合能力，实验室的检测诊断水平才能持续提

升。

猪病防控 Swine Disease

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

2.3 提高人员生物安全意识袁 杜绝污染等安全事

件发生

事实证明提升人员自身生物安全意识，是做好实验

室生物安全工作的基础，大多数生物安全事故均来自人

员意识不到位，应树立实验室工作生物安全第一的原

则[13,14]。严格按照 《实验室生物安全通用要求》 (GB

19489-2008)与 《病原微生物实验室生物安全通用准则》

（WS 233—2017)开展工作[15,16]，制定实验室生物安全负

责人负责总体工作。做好人员自身生物安全防护，实验

室试剂样品的安全使用；同时建立实验室环境生物安全

管理章程，使生物安全的宣传教育真正做到长效化。

3 结语

兽医实验室的工作包括多方面，而人作为实验室的

基本要素，对实验室检测诊断能力起着决定性作用。只

有意识到长久以来一直存在的问题，根据各问题不断改

进，提升人员各个环节规范化的意识和检测人员的专业

技术水平，保证人员工作综合能力稳步提升，才能保障

基层兽医实验室在动物疫病防控中的技术支撑作用。

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.029

收稿日期：2023-04-27

作者简介：杨江宇 （1997-），女，土家族，硕士研究生，主要从事动物群发病的研究

* 通信作者：焦海宏 （1975-），男，副教授，硕士生导师，研究方向为动物群发性疾病的防控

猪源葡萄球菌的分离与鉴定

杨江宇 1 焦海宏 2* 肖 静 1 万金隆 1

渊

1 塔里木大学动物科学与技术学院袁 新疆阿拉尔 843300曰

2 兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室袁 新疆阿拉尔

843300冤

摘 要院 为了从新疆南部某猪场患病仔猪的病料中分离猪源葡萄球菌袁 试验对猪的病料进行了细菌分离培养尧 形态学观察及

生化试验袁 初步鉴定出 7 株猪源葡萄球菌曰 对 7 株猪葡萄球菌进行 16S rRNA 基因片段扩增和测序袁 将测序结果与数据库

NCBI 中的序列进行同源性比对袁 结果表明袁 与猪源葡萄球菌的核苷酸序列的同源性达到 99.93%袁 说明从猪病料中分离的

7 株菌株为猪源葡萄球菌遥 此后对 7 株猪源葡萄球菌进行药敏试验袁 发现该菌对氧氟沙星尧 环丙沙星尧 头孢唑啉尧 万古霉

素尧 新霉素高度敏感袁 对青霉素尧 四环素尧 克林霉素尧 头孢他啶中度敏感袁 对庆大霉素尧 林可霉素尧 红霉素耐药遥

关键词院 猪源葡萄球菌曰 分离鉴定曰 生化试验曰 16S rRNA曰 药敏试验

中图分类号院 S828曰S851 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0129-06

开放科学渊资源服务冤标识码渊OSID冤袁扫一扫袁了解文章更多内容

Isolation and Identification of Staphylococcus in Swine

YANG Jiangyu1

, JIAO Haihong2*

, XIAO Jing1

, WAN Jinlong1

(

1School of Animal Science and Technology, Tarim University, Alar 843300, China; 2Southern Xinjiang Animal Disease Diagnosis and

Prevention and Control Engineering Laboratory, Alar 843300, China)

Abstract: In order to isolate staphylococcus of porcine origin from the diseased piglets of a pig farm in South Xinjiang, the experiment

was carried out on the diseased pig materials for bacterial isolation and culture, morphological observation and biochemical tests, and

seven strains of staphylococcus of porcine origin were identified initially. The 16S rRNA gene fragment was amplified and sequenced on

seven strains of Staphylococcus, and the sequencing results were compared with the database NCBI, and the results showed that the

homology of nucleotide sequences with Staphylococcus suis reached 99.93%, indicating that seven strains were isolated from the swine

disease materials as Staphylococcus. Thereafter, drug susceptibility testing of seven strains of staphylococci of porcine origin revealed

that the organism was highly susceptible to ofloxacin, ciprofloxacin, cefazolin, vancomycin and neomycin, moderately susceptible to

penicillin, tetracycline, clindamycin and ceftazidime, and resistant to gentamicin, lincomycin and erythromycin.

Key words: Staphylococcus infection in pigs; separation identification; biochemical tests; 16S rRNA; susceptibility testing

猪病防控 Swine Disease

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China Swine Industry

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1 前言

葡萄球菌病是由葡萄球菌引起的人和动物多种疾病

的总称，如皮肤的化脓性炎症、菌血症、败血症和各种

内脏器官的严重感染。猪源葡萄球菌感染仔猪会引起渗

出性皮炎，同时也叫“猪油皮病”，是一种仔猪急性接触

性传染病。该菌常寄居于皮肤、黏膜上，当动物机体的

抵抗力低下或皮肤、黏膜等破损时，病菌便乘虚而入，

渗出性皮炎是该病菌引起猪发病的主要症状[1]。一旦仔

猪感染葡萄球菌病，不仅会出现皮肤感染，还会影响身

体的正常生长发育，严重的导致死亡。

1.1 病原

猪源葡萄球菌是微球菌科葡萄球菌属的一群革兰氏

阳性球菌，是一种圆球形、无鞭毛、无荚膜、不能运动、

无芽孢的病原菌，该病原菌对培养基要求不高，普通培

养基上可正常生长；在含血液琼脂固体培养基上生长成

表面光滑、边缘湿润、圆形无溶血环的菌落；肉汤培养

基上生长成浑浊菌落；在麦康凯培养基上无法良好生

长。该病原菌对环境要求不严格，具有良好的耐受力，

在 pH 值 4.5～9.0 的环境中，均能生长，生长最适温度

为 37℃左右，加热至 80℃ 30 min 才能杀灭，瞬间杀灭

需要加热至 100℃，该菌在干燥脓汁内可存活 20～80 d[2]。

1.2 流行病学

葡萄球菌在自然环境中分布极为广泛，在空气、土

壤、食物、污水、尘埃中都有存在，也是人和动物体表

及上呼吸道的常驻菌。仔猪感染猪源葡萄球菌的因素很

多，如饲养管理与饲养圈舍的环境、饲养工具、猪群免

疫力等[3]。葡萄球菌主要危害 5～10 日龄的乳猪，其次

是断奶仔猪，在急性期的发病率可高达 100%，死亡率

达 70%～100%，一年四季都可能发生，但是发病最多

的是在夏季和秋季温暖潮湿的季节，没有明显的地域特

征，传播途径主要通过猪与猪之间的接触感染，在母猪

的皮肤和耳朵等处隐藏的细菌为主要的传染源[4,5]。因为

发病率和致死率极高，所以给我国规模化养猪业造成严

重的经济损失[6]。

1.3 临床症状和病理变化

感染葡萄球菌的猪发病初期皮肤红肿，渗出粘稠的

液体，形成结痂，有一股恶臭，呈横纹龟裂，用力将痂

皮剥掉，露出红色的伤口，里面有粘稠的液体和脓性分

泌物的红色创面，随着病程延长，在伤口上会形成一块

块黑色纽扣状结痂[7]。病猪眼结膜苍白，眼部水肿，病

变结痂揭开后可暴露鲜红色创面，创口皮肤湿润，黏膜

浆性脓液，病猪体表淋巴结体积变大，并出现肿胀和出

血，肝脏、肾脏、脾脏等组织肿胀，输尿管体积变大，

并有细胞碎片，部分病猪肾脏淤血，肾盂内有许多化脓

病灶，呈黄豆粒状。病猪胃肠空虚，部分病猪腹腔内有

化脓性病灶[8]。

1.4 分离鉴定猪源葡萄球菌的目的和意义

采集阿克苏地区某猪场 3 只患病猪的病料，对其进

行细菌培养、形态学观察、生化试验以及药敏试验和

PCR 测序，分离出猪源葡萄球菌。近年来，渗出性皮炎

的危害虽然未达到严重影响生产的程度，但在某些猪场

已成为一个严重问题，也已成为猪的一种常见病。该病

通常呈散发性，猪一旦感染该病，其药物的治疗效果较

差，病死率仍较高，导致养猪业发生严重的经济损失[9]。

我国猪渗出性皮炎发病率增多已是客观存在，研究和关

注该病的病原、流行病学及发病机理对其防治具有重要

意义。

2 试验材料

2.1 试验动物

本试验材料来源于新疆阿克苏地区某猪场，从保育

舍挑选典型病例活猪 3 头。

2.2 试验仪器与试剂

GSP 9080WBE 型隔水式恒温培养箱由上海博讯实

业有限公司生产，CX31 数码生物显微镜由上海尼康仪

器有限公司生产，C1000 Touch PCR 仪由 Bio-Rad 中

国公司生产，DYY12 型电泳仪由北京六一仪器厂生产，

Pico17 型高速离心机由赛默飞世尔科技有限公司生产，

C1000 TouchTM 型全自动凝胶成像分析仪由 Bio-Rad

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中国公司生产。

胰蛋白胨大豆肉汤 （TSB） 由 Solarbio 生产，LB 琼

脂由青岛高科技工业园海博生物技术有限公司生产，革

兰氏染色试剂由上海生物工程有限公司生产，DL2000

Marker 由北京天根生化科技有限公司生产，细菌 16S

rRNA 通用引物 （27F,1492R） 由上海生物工程技术服务

有限公司合成，细菌基因组 DNA 提取试剂盒由北京天

根生化科技有限公司生产，核酸染液 GelvlewI 由上海生

物工程技术服务有限公司生产，药敏纸片由杭州微生物

试剂有限公司生产。

3 试验方法

3.1 剖检采样

无菌条件下采集病猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、

肾脏等组织，划线接种于培养基上培养。同时，将组织

样品 -80℃保存备用。

3.2 分离培养

配制 TSB 固体培养基、5% LB 绵羊血平板培养基和

TSB 液体培养基备用。把采集好的病料放入操作台中，

做好无菌防护。把采集的病料用刀切下一块，用高温灼

烧冷却后的接种环从切面直接插入病料组织中，抽出后

用三线法接种于 TSB 培养基和 5% LB 绵羊血平板培养

基上，在 37℃恒温箱中培养 10 h，观察第 1 代培养菌

在培养基上的生长情况。用革兰氏染色镜检，观察细菌

的颜色、大小、形态[9]，再用接种环挑取固体培养基上

的菌落接种于 TSB 培养基和 5% LB 绵羊血平板培养基

上进一步纯化培养，镜检观察第 2 代培养菌。取纯化后

的菌落接种于 TSB 液体培养基上，通过 37℃摇床增菌，

然后革兰氏染色镜检，即可得到纯化的第 3 代培养菌。

3.3 形态学观察

固体培养基上形态学观察，选择干净灭菌的载玻

片，往载玻片上滴 1 滴蒸馏水备用，用高温灭菌后的接

种环在培养基上挑选生长情况良好的菌落蘸取其一半，

于蒸馏水中稀释，用火焰固定法固定，然后用革兰氏染

色法进行染色，结晶紫 1～2 min、碘液 1～3 min、酒精

30～60 s、复红染液 15～30 s，自然风干后用显微镜观

察其颜色、形态、大小、结构。液体培养基形态学观察，

取出纯化的菌液放入操作台中，选择干净的载玻片备

用，用移液枪取 10 滋L 菌液放入载玻片上，用灭菌的接

种环顺时针旋转抹开，用火焰法固定，然后用革兰氏染

色法进行染色，风干后显微镜下观察，与固体培养基上

的细菌进行对比。

3.4 生化试验

严格按照无菌操作，在无菌操作台上进行。准备好

葡萄球菌生化试验所需要的微量生化鉴定管、山梨醇、

木糖、葡萄糖蛋白胨水 （VP）、尿素、葡萄糖产气、硫

化氢等，将分离好的纯种菌液用移液枪取 50 滋L 分别接

种于微量生化管中，用封口膜密封好放于 37℃的恒温培

养箱培养 12 h，即可取出观察。VP 试验的葡萄糖蛋白

胨水微量管取出后还需要先加入 VP 试剂甲液 3 滴，再

加 VP 试剂乙液 1 滴，然后再放回恒温培养箱中培养 4 h

取出观察结果。

3.5 分子生物学鉴定

3.5.1 DNA 提取

⑴取菌液 300 滋L 于 200 mL 离心管中，加入 DNA

zol 700 滋L，颠倒 3 次使其混匀然后静置 5 min，放入离

心机中 12 000 rpm 离心 10 min；

⑵取上清液 800 滋L，加入到新的 2 mL 离心管中；

⑶再加入 500 滋L 无水乙醇，颠倒混匀 5 次，静置 3

min，放入离心机 7 500 rpm 离心 3 min 弃上清液；

⑷加入 800 滋L 75%无水乙醇，颠倒混匀，放入离

心机 12 000 rpm 离心 5 min 弃上清液；

⑸重复第 （4） 步；

⑹开盖静置使无水乙醇挥发；

⑺加入 40 滋L 8 mM 的 NaOH，用移液枪重复稀释

混匀即可得到提取的 DNA；

⑻过夜保存放入 4℃冰箱，长期保存放入 -20℃冰

箱。

3.5.2 PCR

检测 16S rRNA 的扩增所需反应体系及反应条件[10]，

见表 1、表 2。

3.5.3 电泳

⑴制作凝胶：称取 0.5 g 琼脂糖，倒入 50 mL （1×

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2023 年 第 6 期

TAE） 缓冲液，放入微波炉加热 2 min，待其完全溶解再

次加热至清澈透明无沉淀；选择大小合适的齿梳插入胶

板中卡好，备用；静待琼脂糖溶液冷却 1 min 后加入

5 滋L 核酸染液充分混匀；倒入制胶板中，确认凝胶中无

气泡或无异物，等待 15～30 min 凝固后拔出梳子[11]。

⑵点样：第一个泳道加入 DL2000 marker，其余泳

道加 PCR 产物，最后一个泳道加空白对照；

⑶把点样好的凝胶板放入 DYY12 型电泳仪中 30

min；

⑷电泳琼脂糖凝胶板放入 C1000 TouchTM 型全自

动凝胶成像分析仪进行观察；

⑸把扩增所得基因片段送测序公司进行测序。

3.5.4 测序及序列比对

把测序的基因片段，用数据库 NCBI 的序列进行同

源性比对。

3.6 药敏试验

采用药敏纸片扩散法进行药敏试验，严格按照无菌

操作，在无菌操作台上进行。首先选好该试验所需要的

药敏纸片：氧氟沙星、庆大霉素、万古霉素、环丙沙星、

头孢唑啉、红霉素、克林霉素、头孢他啶、新霉素、青

霉素、四环素、林可霉素[12]。选择 3 个 BD 培养基，用

移液枪取 100 滋L 分离好的葡萄球菌菌液接种于 BD 培养

基上，然后用高温灭菌后的涂布棒均匀涂布 （必须均匀

涂布不然会影响试验结果），涂布均匀后，在培养基上

选择 4 个适当位置放上药敏纸片 （放药敏纸片的时候按

压一下以防脱落），放好纸片后，把培养基放入 37℃恒

温培养箱中培养 18～24 h 取出，用游标卡尺测量抑菌圈

直径即可。结果判定参照美国实验室标准委员 （NCCLS） 推荐的规定进行判断，即抑菌圈直径＞20 mm 为

极敏，在 15～20 mm 之间为高敏，在 10～14 mm 之间

为中敏，＜10 mm 为低敏，无抑菌圈为耐药[13,14]。

4 结果

4.1 剖检结果

体表观察有划水现象、呼吸急促、喘气、站立困难、

精神萎靡不振、眼结膜苍白、消瘦、口鼻眼有黏液、皮

肤各处有创伤结痂、皮肤外表泛红呈红斑、前肢肘关节

处有许多透明小水泡，如下图 1。

肝脏色泽不均一、有淤血，部分肝脏颜色偏黄、部

分肝脏颜色呈暗红色、质地实，切开肝脏，血液颜色偏

黑红，胆囊肿大、胆汁颜色为蓝绿色，肺脏质地实而硬、

颜色不均一、有大面积出血块。肺叶外缘苍白无色。心

脏心包膜与心脏分离明显、心脏颜色偏灰白。脾脏上有

白色结节、有水泡、颜色偏灰紫。肾脏色泽不均一、有

散状出血斑、肾乳头呈灰白色、肾盂有脓性分泌物 （尿

酸盐沉积）。有些肠段鼓气、空虚、透明、充血，有些肠

段内含有暗褐色的比较干硬的圆球状内容物，肠系膜出

表1 PCR反应体系

反应组分 体积/μL

2×Tap Plus PCR Mix 12.5

ddH2O 9.5

上游引物（27F） 0.5

下游引物（1492R） 0.5

模板 DNA 2.0

总体积 25.0

表 3 不同剂量的益生菌制剂对仔猪血清免疫指标的影响 表 2 PCR反应条件

预变性温度/时间

（℃/min）

变性温度/时间

（℃/s）

退火温度/时间

（℃/s）

延伸温度/时间

（℃/s）

循环次数

/次

延伸温度/时间

（℃/min）

94/5 94/30 55/30 72/90 35 72/10

图 1 病猪体表观察

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血严重、血管明显肿大。胃中黏液增多、有黄色液体残

渣、出血严重。

4.2 分离培养及染色镜检结果

4.2.1 分离培养结果

将病料组织液接种于 TSB 培养基和 5%绵羊血平板

培养基上培养 10 h，发现 TSB 培养基表面长有圆形、不

透明、表面隆起、光滑、圆珠状菌落，直径 1.0～2.0

mm；5%绵羊血平板培养基表面长有圆形、乳白色、针

尖状菌落、稍粘、无溶血环。

4.2.2 镜检观察结果

用革兰氏染色法进行染色观察，发现菌体呈蓝紫

色，菌株属于革兰氏阳性菌，其形态特征主要为双球或

短链状排列或数个球状细菌串联成葡萄状，可将其初步

判定为猪源葡萄球菌。

4.3 生化试验结果

生化鉴定结果见表 3，7 株生化试验结果一样，均

符合猪源葡萄球菌的生化特性。

4.4 PCR 检测结果

用显微镜观察得到的 7 个样本葡萄球菌基因组作为

模板，一个空白对照，用 PCR 法对 16S rRNA 基因序列

进行扩增，通过电泳 30 min，用 C1000 TouchTM 型全

自动凝胶成像分析仪进行观察，该试验菌株 16S rRNA

基因 PCR 产物的大小约为 1 500 bp，与预期片段大小

基本符合，而且阳性对照和阴性对照结果成立。

进一步送北京测序公司测序得到 7 株细菌基因片

段，用数据库 NCBI 的序列进行多重比对，得出结果为

分离出来的菌株 DNA 与葡萄球菌的核苷酸同源性高为

99.93%，由此推断本试验获得的菌株为猪源葡萄球菌。

4.5 药敏试验结果

采用药敏纸片扩散法检测分离菌株对不同抗生素药

物的敏感性，试验结果如表 4 所示，分离菌株对抗生素

氧氟沙星、环丙沙星、头孢唑啉、万古霉素、新霉素高

度敏感；对青霉素、四环素、克林霉素、头孢他啶中度

敏感；对庆大霉素、林可霉素、红霉素产生耐药。

5 讨论

本试验为了分离猪源葡萄球菌，从阿克苏某猪场挑

选 3 头疑似葡萄球菌感染的患病仔猪。通过解剖观察内

脏病变情况，发现病变明显的部位主要有肠、脾脏、肝

脏、肺脏和胆囊，实验室细菌分离培养及革兰氏染色，

显微镜观察菌落颜色、形态、大小，初步判断分离得到

葡萄球菌；然后通过生化试验鉴定和 PCR 测序结果得出

7 株与猪源葡萄球菌的同源性达 99.93%的菌株。药敏试

验显示该菌株对庆大霉素、青霉素、四环素、林可霉素、

红霉素、克林霉素、头孢他啶均有耐药性，而对头孢唑

啉、万古霉素、氧氟沙星、环丙沙星、新霉素表现敏感；

头孢唑啉、新霉素与查找资料中标准抗菌谱结果存在差

异[15]，病菌应该对该 2 种抗生素产生低敏和耐药性，但

表3 生化试验结果

注：“＋”表示为反应阳性，“－”表示为反应阴性。

序号 项目名称 结果

1 山梨醇 －

2 木糖 －

3 尿素 ＋

4 葡萄糖产气 ＋

5 硫化氢 －

6 VP －

7 氧化酶 －

8 过氧化氢 ＋

表4 分离菌株耐药性分析

注：S 表示为高度敏感，I 表示为中度敏感，R 表示为耐药。

序号 药品名称 抑菌圈直径/mm 敏感性

1 氧氟沙星 25.09 S

2 环丙沙星 21.30 S

3 头孢唑啉 28.06 S

4 庆大霉素 0 R

5 万古霉素 15.11 S

6 青霉素 5.39 I

7 四环素 7.39 I

8 林可霉素 0 R

9 红霉素 0 R

10 克林霉素 11.59 I

11 头孢他啶 12.43 I

12 新霉素 14.12 S

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在试验中却对其表现高敏性。此外，其他文献报道葡萄

球菌对克林霉素、庆大霉素及四环素敏感性较高，但本

试验的菌株对以上 3 种抗生素却产生低敏和耐药性[16]。

通过了解发现，3 头病猪在猪场治疗时使用的抗生素为

庆大霉素和四环素，可能是由于该原因导致病菌发生变

异，对药敏试验结果造成一定影响。病猪临床症状的不

明显和解剖病变结果的差异也可能是由于病猪在猪场接

受治疗所引起。由此可推断该 3 头患病仔猪是由葡萄球

菌和其他病菌共同感染所致。

6 结论

本试验从 3 头病猪料中分离出 7 株猪源葡萄球菌，

通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验、PCR 检测

都与猪源葡萄球菌性状一致。最后进行药敏试验，结果

显示，该菌对氧氟沙星、环丙沙星、头孢唑啉、新霉素

高度敏感，对青霉素、四环素、克林霉素、头孢他啶中

度敏感，对庆大霉素、林可霉素、红霉素耐药。

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.030

收稿日期：2023-02-13

作者简介：杨春利 （1978-），女，兽医师，研究方向为动物疫病防治

氟苯尼考和硫酸粘菌素对猪源大肠杆菌尧

链球菌的体外抑菌试验

杨春利

渊鲁山县农业农村局袁 河南平顶山 467300冤

摘 要院 为研究氟苯尼考与硫酸粘菌素联合用药对猪源细菌病的治疗效果袁 试验采用肉汤 2 倍稀释法测定了 2 种抗生素单

独使用对 12 株大肠杆菌尧 15 株链球菌的 MIC 值袁 并采用棋盘稀释法测定联合用药对大肠杆菌尧 链球菌的体外抑菌效果遥

结果显示袁 单独用药时氟苯尼考对大肠杆菌尧 链球菌的 MIC 值分别在 2耀跃128 滋g/mL 和 0.125耀1 滋g/mL曰 硫酸粘菌素

对大肠杆菌尧 链球菌的 MIC 值分别为 0.5耀8 滋g/mL 和 64耀跃128 滋g/mL遥 联合用药对大肠杆菌尧 链球菌的 FIC 值为

0.5 滋g/mL尧 0.75 滋g/mL 或1.0 滋g/mL袁 发生协同或者相加作用遥 研究表明联合用药的抑菌效果比单药使用好袁 为复方

抗生素药物研制和兽医临床用药提供了依据遥

关键词院 生猪曰 氟苯尼考曰 硫酸粘菌素曰 大肠杆菌曰 链球菌曰 抑菌

中图分类号院 S828曰S852.61 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0135-04

开放科学渊资源服务冤标识码渊OSID冤袁扫一扫袁了解文章更多内容

大肠杆菌 （Escherichia coli, E.coli） 是肠杆菌科肠

杆菌属革兰氏阴性鞭毛状细菌，能引起猪的多种疾病，

主要感染哺乳仔猪、断奶仔猪，是世界范围内导致哺乳

仔猪和断奶仔猪死亡的重要致病菌[1]。猪大肠杆菌病根

据临床表现不同分为仔猪白痢、仔猪黄痢和猪水肿病[2]。

猪链球菌 （Streptococcus suis, S.suis） 是世界范围内

影响养猪业生产的又一重要病原菌，它也被认为是一种

新兴的人畜共患病原体，患病猪表现为关节炎、脑膜

炎、心内膜炎、败血症及支气管肺炎等多种病理特征[3,4]。

以上 2 种细菌性传染病在我国各地区养猪场广泛分布，

且存在混合感染病例，发病率和病死率较高，给养猪生

产者造成严重的经济损失，且威胁公共卫生安全。抗生

素药物防治是临床兽医实践中常用的防控大肠杆菌病和

猪链球菌病的方法，氟苯尼考 （florfenicol） 是新一代动

物专用的酰胺醇类广谱抗生素，对革兰氏阳性菌、革兰

氏阴性菌和支原体均有作用，对大肠杆菌、沙门氏菌、

炭疽杆菌、肺炎链球菌、葡萄球菌及衣原体等多种病原

体均有敏感性[5]。硫酸粘菌素 （Colistin Sulfate） 为多粘

杆菌产生的由多种氨基酸和脂肪酸组成的碱性多肽类抗

生素[6]，主要用于防治动物肠道细菌感染和促进动物的

生长，对于大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌等革兰氏阴

性菌有较强的抑制作用[7]。但是，我国养殖业长期使用

或者滥用抗生素导致的细菌耐药谱增宽、耐药性增强、

多重耐药情况越来越严重，使得抗生素治疗动物疫病的

效果下降，给动物的疫病诊治带来困难。正确的抗生素

联合用药可以降低药物副作用，减少细菌耐药性的发

生，发挥协同或相加的药效，提高治疗效果[8]。为了提

高抗生素药效、用药安全性及抗菌活性，降低猪大肠杆

菌、链球菌带来的危害，本试验通过微量肉汤稀释法，

观察了氟苯尼考和硫酸粘菌素联合用药对治疗猪大肠杆

猪病防控 Swine Disease

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2023 年 第 6 期

菌、链球菌的效果，以期为兽医临床科学用药提供参考。

1 试验材料与方法

1.1 试验抗生素

试验用抗生素由河南华牧生物科技有限公司生产，

分别为含量 99.00%的氟苯尼考，批号：2206121；含量

98.00%的硫酸粘菌素，批号：2207152。

1.2 试验菌种

猪大肠杆菌 12 株，猪链球菌 15 株，均采自河南省

平顶山市鲁山县部分养猪场发病猪的病料，经过临床分

离鉴定后备用。大肠埃希菌质控菌 ATCC25922、链球

菌质控菌 CVCC3223 均购自中国兽医药品监察所。

1.3 培养基

MH 肉汤培养基、MH 琼脂平板、KF 链球菌琼脂、

麦康凯培养基均为广东环凯微生物科技有限公司生产。

1.4 药物储备液的制备

称取氟苯尼考 2.56 g，以丙酮—水溶解、定容至

1 000mL，配成浓度为 2 560 滋g/mL 的氟苯尼考储备液，

-20℃保存备用。称取硫酸粘菌素 2.56 g，用去离子水

溶解、定容至 1 000mL，配制硫酸粘菌素储备液，最终

浓度为 2 560 滋g/mL，于 -20℃保存备用。

1.5 菌液的制备

将大肠杆菌菌液、链球菌菌液复苏后分别接种于麦

康凯培养基、KF 链球菌琼脂培养基上，37℃培养 24 h，

挑取典型菌落分别接种于 MH 肉汤培养基中，增菌培养

24～36 h，再挑取菌液分别接种于 MH 琼脂平板、含

5%犊牛血清的 MH 琼脂平板培养基上，37℃培养 24 h，

然后分别挑取菌落接种于 MH 肉汤培养基中，大肠杆菌

37℃培养 8 h、链球菌 37℃培养 16 h，平板计数法进行

菌 落 计 数 ， 最 后 用 PBS 稀 释 菌 液 浓 度 至 1 ×106

CFU/mL。

1.6 单药最低抑菌浓度 渊MIC冤 测定

采用 96 （8×12） U 型孔板微量肉汤 2 倍稀释法测

定每种药物的 MIC 值。每排的第 1～10 孔加入肉汤 50

滋L，第 1 孔加入 50 滋L 终浓度为 2 560 滋g/mL 的硫酸粘

菌素储备液，2 倍比稀释，依次稀释至第 10 孔。然后在

第 1～10 孔加入事先稀释好的 1×106 CFU/mL 的菌液

50 滋L，第 11、12 孔分别设置为阳性 （有菌无药）、阴

性 （无菌无药） 对照组。每种抗生素对每个菌株做 3 个

重复。同时以链球菌质控菌 CVCC3223 做质量控制，

37℃培养 24 h，观察每孔内培养液浑浊程度的变化。氟

苯尼考的 MIC 值测定参考上述操作方法进行。当质控菌

MIC 在美国临床和实验室标准协会 （CLSI） 制定的药物

敏感性范围内[9]，且阳性对照孔内培养液浑浊 （细菌生

长良好），阴性对照孔内培养液清亮 （无细菌生长） 时，

无细菌生长孔中的最低浓度药物即为药物的 MIC 值。细

菌敏感性判断标准参考 CLSI 判断。见表 1。

1.7 联合抑菌试验

随机取 1.6 中完成单药抑菌试验的菌株 6 株 （大肠

杆菌、链球菌各 3 株），利用棋盘稀释法进行测定氟苯

尼考、硫酸粘菌素联合用药效果。以每种药所对应大肠

杆菌、链球菌 MIC 值为药物稀释度，药物最高浓度为

MIC 值的 2 倍，依次 2 倍比稀释药液最高浓度，分别为

1、1/2、1/4、1/8、1/16，共设 5 个稀释浓度。在 96 孔

细胞培养板上将 2 种药物按照横排和竖排分别进行联合

抑菌试验，每孔加入浓度为 1×106 CFU/mL 的菌液，

37℃培养 18～24 h。同时设阳性、阴性对照，观察孔内

培养液变化。采用联合用药的抑菌指数 （fractional inhibitory concentration, FIC），以判定联合用药的药效安

全性。FIC＝ （联合时 A 药 MIC÷单用时 A 药 MIC） ＋

（联合时 B 药 MIC÷单用时 B 药 MIC）。FIC≤0.5，为协

同作用，0.5＜FIC≤1，为相加作用，1＜FIC≤2，为无

关作用，FIC＞2 为拮抗作用。

表3 不同剂量的益生菌制剂对仔猪血清免疫指标的影响 表1 药物敏感性试验判定标准

大肠杆菌 链球菌

药物名称

敏感（S） 中介（I） 耐药（R） 敏感（S） 中介（I） 耐药（R）

氟苯尼考 ＜2 ≥2～＜8 ≥8 ＜0.25 ≥0.25～＜0.5 ≥0.5

硫酸粘菌素 ＜1 ≥1～＜4 ≥4 ＜64 ≥64～＜128 ≥128

渊滋g/mL冤

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

渊下转第141页冤

2 结果与分析

2.1 2 种药物单用最低抑菌浓度测定结果

由表 2 可知，氟苯尼考对大肠杆菌、链球菌的 MIC

值分别为 2～＞128 滋g/mL、0.125～1 滋g/mL，有 3 株

大肠杆菌对氟苯尼考敏感，占 25.0% （3/12），有 2 株链

球菌对氟苯尼考敏感，占 16.7% （2/12）；硫酸粘菌素对

大肠杆 菌、链球菌的 MIC 值分 别 为 0.5～8 滋g/mL、

64～＞128 滋g/mL，有 2 株大肠杆菌对硫酸粘菌素敏感，

占 13.3% （2/15），有 2 株链球菌对硫酸粘菌素敏感。

2.2 2 种药物联合体外抑菌试验结果

分别挑取完成单独用药抑菌试验的大肠杆菌、链球

菌各 3 株进行联合用药对 2 种细菌的敏感试验，由表 3

可知，联合用药对大肠杆菌、链球菌的 FIC 值分别为

0.5 滋g/mL、0.75 滋g/mL 或 1.0 滋g/mL，发生协同或者

相加作用，均未出现拮抗、无关作用，表明联合用药比

单独用药对防治 2 种细菌性疾病的效果好。

3 讨论

在当前猪混合感染疫病严重的形势下，由于联合用

药能够降低药物的使用剂量和细菌的耐药性，并扩大疫

病防治种类，因此，临床上抗生素联合用药，研制复方

药物成为热点。氟苯尼考的抗菌机制是与细菌 70S 核蛋

白体 50S 亚基上的 A 位点结合，抑制肽酰基转移酶活

性，从而抑制肽链的延伸，干扰细菌蛋白质的合成[10]。

内服和肌肉注射均能表现出吸收迅速、扩散广泛、半衰

期长、血药浓度高等特点，且能较长时间地维持血药浓

度[11]。猪内服氟苯尼考后吸收迅速，给药 5 min 后即可

在血液中测到，且血药浓度较高，Cmax 为 9.87 mg／L，

AUC 值为 132.08 mg/ （h·L），消除缓慢[12]。硫酸粘菌素

抗菌机制在于其吸附在细胞膜表面，药物分子中带正电

荷的游离氨基可与细菌细胞膜中带负电荷的磷酸盐结

合，使细胞膜的表面张力降低和通透性增加，细胞内容

物外漏，导致细菌死亡[13]。2 种抗生素抗菌作用机制不

同，为联合用药提供了条件和可能。

单独使用抗生素的耐药性试验表明，氟苯尼考对大

肠杆菌的 MIC 值在 1～128 滋g/mL，抗菌效果较差，而

对链球菌的 MIC 值在 0.125～1 滋g/mL，比较敏感，抗

菌效果优于大肠杆菌。硫酸粘菌素对链球菌的 MIC 在

32～128 滋g/mL，抗菌效果很差，不如对大肠杆菌的效果

好。这与养猪场抗生素使用不科学及长期使用一种抗生素

有关，应引起注意，尽量轮换用药，不盲目加大剂量。

联合用药的敏感性研究结果显示，2 种抗生素 FIC

值均小于或等于 1 滋g/mL，说明联合用药可以协同或增

加药物效果。康宇[14]等报道，氟苯尼考与硫酸粘菌素联

表2 单独用药最低抑菌浓度 渊MIC冤 测定结果与菌株数

氟苯尼考 硫酸粘菌素

菌株

菌株数/株 MIC/（μg/mL） 菌株数/株 MIC/（μg/mL）

2 0.5

3 1

2 1

2 4 4 2

3 8 3 4

大肠杆菌

4 ＞128 1 8

2 0.125

4 0.25

2 32

5 0.5

链球菌

4 1

13 ＞128

表 3 不同剂量的益生菌制剂对仔猪血清免疫指标的影响 表 3 2 种药物联合体外抑菌试验结果

氟苯尼考 MIC/（μg/mL） 硫酸粘菌素 MIC/（μg/mL）

菌株

单独 联合 单独 联合

FIC 联用结果

大肠杆菌 1 号株 2 0.5 2 0.5 0.5 协同

大肠杆菌 2 号株 4 1 2 0.5 0.5 协同

大肠杆菌 3 号株 128 64 0.5 0.125 0.75 相加

链球菌 1 号株 0.5 0.25 64 64 0.75 相加

链球菌 2 号株 0.25 0.125 256 128 1.0 相加

链球菌 3 号株 1 0.25 1024 256 0.5 相加

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2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.031

收稿日期：2023-02-24

作者简介：王晓艳 （1984-），女，汉族，山东临沂人，本科，副高级兽医师，主要从事兽医研究推广工作

仔猪源链球菌分离鉴定与耐药性试验

王晓艳

渊山东省莒南县检验检测中心袁 山东临沂 276600冤

摘 要院 为了解山东省莒南县仔猪源链球菌流行和耐药性情况遥 2020要2021 年采集山东省莒南县养猪场的病死仔猪鼻拭

子尧 肺脏和肝脏等病料组织 127 份袁 采用常规细菌分离鉴定方法和PCR方法进行链球菌鉴定袁 采用人工感染小鼠试验和 KB 药敏纸片法分别检测链球菌分离菌株的致病性和耐药性遥 结果显示袁 从127 份病料样品中分离到 68 株链球菌袁 链球菌的

检出率为 53.5% 渊68/127冤袁 有 50 株链球菌可引起小白鼠死亡并确定为致病性菌株曰 且此 50 株链球菌致病菌株对新霉

素尧 氟苯尼考尧 大观霉素等 9 种药物的耐药率在 52.0%以上袁 对其他的药物耐药率为 4.0%耀30%遥 本研究为山东莒南地区

养猪场的仔猪源链球菌合理用药及防控提供参考遥

关键词院 仔猪曰 仔猪源链球菌曰 分离鉴定曰 致病性曰 药敏试验

中图分类号院 S828曰S858.28 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0138-04

开放科学渊资源服务冤标识码渊OSID冤袁扫一扫袁了解文章更多内容

链球菌 （Streptococcus） 是临床中常见的人畜共患

病原菌之一，该菌广泛存在于自然界的土壤、水源及养

殖环境中，且大多数的健康动物体内也存在该细菌[1]。

链球菌可以感染多种家畜 （猪、牛、羊、鹿）、家禽

（鸡、鸭、鹅） 甚至感染人，并引起畜禽发病，该菌可以

引起多种动物和人的败血症、脑膜炎、关节炎、肺炎、

乳房炎、腹泻、化脓及毒素引起的休克等一系列的临床

症状，同时该菌可以引起人患病，严重危害着动物和人

类健康，因此，临床上对该病的防控具有重要意义[2,3]。

猪链球菌病是严重危害养猪业的细菌性疾病之一，该病

是由不同血清型的链球菌引起的，对各个阶段的猪只均

有感染，其中对仔猪危害较大，临床上多以急性症状中

的脑膜炎、败血症、心内膜炎和慢性症状的关节炎为常

见，其感染率和死亡率均较高，死亡率高达 80%以上，

且在临床中经常与病毒性疾病 （猪繁殖与呼吸综合征病

毒、猪圆环病毒 2 型） 混合感染，给全球养猪业带来严

重的经济损失[4-7]。

近年来，对于猪链球菌病的报道越来越多，链球菌

可以感染不同阶段的猪，其中对仔猪最易感，尤其 4～

10 日龄仔猪，临床中以肺炎、化脓性感染、渗出性皮炎

及脱水为主要症状，其死亡率较高[8,9]。国内外研究表明，

链球菌有较强的耐药性，且已经普遍存在并呈现逐年增

高的趋势，链球菌的耐药性给临床治疗该病带来一定困

难，且其耐药性可以在动物和人之间相互传播，已成为

公共卫生安全问题[10,11]。本试验对采集患病仔猪病料样

品进行链球菌分离鉴定，并检测其致病性和耐药性，以

期为山东莒南地区仔猪源链球菌的合理用药提供参考。

1 试验材料与方法

1.1 菌株来源

2020—2021 年采集山东莒南县部分养猪场病死仔

猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

猪的鼻拭子、肺脏和肝脏等组织病料 127 份，采集的病

料组织经处理后，进行链球菌的分离鉴定。

1.2 细菌分离与培养

将采集的样品进行处理后，无菌条件下接种于 7%

绵羊脱纤血培养基上，进行增菌培养，37℃恒温培养

12～18 h 后，挑取单个菌落接种于链球菌培养基中进行

鉴别培养 （12～18 h），然后进行革兰氏染色镜检观察其

形态学。

1.3 生化试验鉴定

参照 Raid ID 32 STREP 阳性菌鉴定试剂盒说明书进

行试验，将分离菌株接种在营养肉汤中培养至对数期，

调整菌液浓度为 0.5 个麦氏浊度，无菌条件下，接种于试

纸条中，37℃培养 12～18 h，然后进行生化特性鉴定。

1.4 细菌 PCR 鉴定

设计细菌 16S rRNA 基因通用引物，送上海生工生

物工程技术服务有限公司合成引物 （表 1）。用水煮法提

取分离菌株的基因组并进行 PCR 鉴定。回收 PCR 产物，

送上海生工生物工程技术服务有限公司测序，通过

BLAST 搜索比对结果，以确定为链球菌菌株。

1.5 致病性试验

将分离菌株接种于营养肉汤中，并培养至对数期，

调整菌液浓度为 107 CFU/mL，每株分离菌株腹腔注射给

2 只昆明系小鼠，剂量为 0.25 mL/ 只 （107 CFU/mL），

对照组小鼠腹腔注射等量的无菌生理盐水。试验期 7 d，

观察小鼠的发病情况。

1.6 药敏试验

分离菌株的药敏试验参照美国国家临床实验室标准

化委员会 （NCCLS） 2013 年推荐的药敏试验法标准进

行操作与结果判定。

2 结果与分析

2.1 细菌分离培养

疑似链球菌的菌株通过 7%绵羊脱纤血培养基、甘

露醇氯化钠鉴别培养基分离培养及镜检观察其形态学结

果，均符合链球菌的培养特性和形态学特征。

2.2 细菌生化试验

通过 Raid ID 32 STREP 阳性菌鉴定试剂盒进行生化

鉴定，68 株分离菌株初步鉴定为链球菌。

2.3 细菌 PCR 鉴定

对初步鉴定为链球菌的菌落，用 PCR 进行鉴定。结

果显示分离的 68 株分离菌株均扩增出大约为 1 500 bp

的目的条带 （图 1）。通过测序对比 68 株分离菌株与参

考株 （链球菌） 的同源性均大于 98%，构建系统发育树

（图 2） 说明分离株为链球菌，此试验链球菌的检出率为

53.5% （68/127）。

2.4 致病性试验

攻毒组小鼠在攻毒 2～3 d 后，出现了不同程度的发

病，且个别攻毒小鼠不表现任何症状而出现急性死亡，

剖检死亡小鼠后采集病料组织，分离得到链球菌，攻毒

试验结束后，对照组小鼠仍健康存活。经统计，有 50

株链球菌能引起小鼠死亡，确定为致病性菌株。

表1 引物序列

引物 引物序列（5'-3'） 长度/bp 退火温度/℃

AGAGTTTGATCCTGGCTCAGG

16S rRNA

TACGGCTACCTTGTTACGACTTＧ

1 500 55.5

图1 部分分离菌株PCR鉴定结果

M：DL 2 000 DNA marker；1-8：分离菌株；9：空白对照

图 2 分离菌株代表株 渊JM202010冤 系统发育树

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2023 年 第 6 期

2.5 药敏试验

分离菌株的耐药性分析显示，50 株致病性链球菌对

新霉素、氟苯尼考、大观霉素、氨苄西林、庆大霉素、

磺胺间甲氧嘧啶、青霉素、阿莫西林、氨苄西林、多西

环素等 9 种药物的耐药率为 52.0%～84.0%，对头孢噻

呋、头孢噻肟、恩诺沙星、环丙沙星、林可霉素 5 种药

物耐药率为 4.0%～30%；说明临床中分离的 50 株致病

性链球菌对临床中常用的药物具有不同的耐药性。

3 讨论

链球菌是一种临床上常见的人畜共患的条件性致病

菌，该菌广泛存在于动物和人类的体内及环境中，可以

通过多种途径 （直接接触传播、空气传播、创伤皮肤和

黏膜、脐带等感染） 在不同动物 （鸡、猪） 之间传

播[10,11]。链球菌可以引起猪、牛、羊、鸡、鸭、兔等多种

动物感染，急性病例具有发病比较急、死亡较迅速等特

征，为临床中畜禽常见的急性、败血性疾病[12]。陈申申

等[13]报道了从患有脑膜炎的仔猪体内分离得到致病较强

的链球菌。王飞鸿等[14]从规模化养殖场死亡的仔猪中分

离得到致病性较强的链球菌。猪链球菌病成为养猪业中

常见的细菌性疾病之一，尤其对仔猪的危害较大。本试

验采集山东莒南地区养猪场病死仔猪的鼻拭子、肺脏和

肝脏等病料组织 127 份，分离到 50 株致病性链球菌，

说明链球菌在该地区猪场中流行较严重，可能对仔猪存

在潜在威胁，养猪场应注意猪链球菌的防控，同时注意

环境卫生，加强饲养管理，提高仔猪的免疫力。

临床中猪链球菌病主要通过抗生素药物进行防治，

随着抗生素的不合理使用或过量添加，猪场中的一些细

菌对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类等药物产生了

较强的耐药性，其耐药性菌株不断出现，同一地区不同

养殖场的细菌，其耐药性也存在差异，降低了抗生素对

猪病的治疗效果[7]。本研究表明，50 株致病链球菌对新

霉素、氟苯尼考、大观霉素等 9 种药物耐药率在 52.0%

以上，对其他的药物耐药率为 4.0%～30%。说明从该地

区养猪场中分离的链球菌对临床中常用的药物存在不同

耐药性，且耐药严重。因此，在临床中治疗猪链球菌病

应该进行药敏试验，选择敏感的药物进行交替使用，同

时应该配合环境消毒，提高治疗效果。

4 小结

综上所述，猪链球菌在养猪场中普遍存在，从山东

省莒南县养猪场中采集的猪病料中，分离出 50 株致病

性链球菌，且其对新霉素、氟苯尼考、大观霉素等 9 种

药物的耐药性较高。因此，养猪企业应重视猪场中的细

菌性疾病，尤其人畜共患的链球菌病，在防治方面应做

好环境卫生和合理使用抗生素药物。

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表 3 不同剂量的益生菌制剂对仔猪血清免疫指标的影响 表2 药敏试验结果

药物 耐药菌数/株 耐药率/% 药物 耐药菌数/株 耐药率/%

头孢噻呋 5 10.0 多西环素 26 52.0

头孢噻肟 2 4.0 磺胺间甲氧嘧啶 31 62.0

青霉素 32 64.0 氟苯尼考 35 70.0

阿莫西林 27 54.0 恩诺沙星 14 28.0

氨苄西林 28 56.0 环丙沙星 16 32.0

新霉素 42 84.0 大观霉素 38 76.0

庆大霉素 34 68.0 林可霉素 12 24.0

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Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

渊上接第 137 页冤

用对猪大肠杆菌、链球菌均比单独用药效果有明显增

强，均呈现协同作用。李赛等[15]报道，硫酸粘菌素与氟

苯尼考联合用药对大肠杆菌的 FIC 值≤0.5，为协同作

用，抑菌效果比单一用药提高 2～8 倍。本研究结果与

上述结果基本一致。

4 小结

本研究中，通过对 2 种药物单独使用和联合使用的

对比，发现 2 种药物联合使用对大肠杆菌和链球菌的抑

菌效果优于单独使用。因此，在治疗猪只的大肠杆菌和

链球菌感染性细菌疫病时，建议联合用药，这样既可以

减少药物单独使用时的剂量，又能克服目前氟苯尼考或

粘菌素抗菌活性降低的缺点。

参考文献

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猪病防控 Swine Disease

Prevention and Control

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China Swine Industry

2023 年 第 6 期

DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.032

收稿日期：2022-12-07

作者简介：陈新湖 （1967-），男，汉族，湖南祁东人，大专，中级兽医师，主要从事兽医方面的研究推广工作

仔猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定

及耐药性检测

陈新湖

渊湖南省衡阳市祁东县金桥镇农业综合服务中心袁 湖南衡阳 421600冤

摘 要院 为了了解湖南省衡阳市祁东县不同规模化养猪场及散养户中仔猪副猪嗜血杆菌的流行情况和耐药性遥 采集衡阳祁东

地区不同规模化养猪场及散养户中患呼吸道病死仔猪的口鼻拭子尧 胸腔积液尧 肺脏等病料组织 187 份袁 采用细菌分离培养尧

形态学观察尧 卫星试验和 PCR 方法进行副猪嗜血杆菌鉴定袁 并采用人工感染小鼠试验和 K-B 药敏纸片法分别检测副猪嗜血

杆菌的致病性和耐药性遥 结果显示袁 从采集的 187 份病料样品中分离到 78 株副猪嗜血杆菌袁 分离率为 41.7%袁 其中分离

的 50 株副猪嗜血杆菌可以引起小白鼠死亡袁 为致病性菌株曰 此 50 株致病性副猪嗜血杆菌对青霉素尧 阿莫西林尧 氨苄西林

等 8 种药物的耐药率在 44.0%耀50.0%之间袁 对其他药物的耐药率为 4.0%耀44.0%遥 本研究为仔猪副猪嗜血杆菌病的合理

用药及防控提供参考遥

关键词院 仔猪曰 副猪嗜血杆菌曰 分离鉴定曰 致病性曰 药敏试验

中图分类号院 S828曰S852.61 文献标识码院 A 文章编号院 1673-4645(2023)06-0142-04

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副猪嗜血杆菌 （Haemophilus parasuis, Hps） 为临

床中常见的条件性致病菌之一，该菌广泛存在于自然界

的养殖环境中，还存在于猪的上呼吸道中，尤其是在养

猪过程中，如果饲养管理不当、应激 （如天气骤变、转

群、运输） 等导致猪的免疫力下降，容易引发副猪嗜血

杆菌病[1-3]。副猪嗜血杆菌具有多种血清型，可以感染不

同阶段的猪只，尤其是对 4～8 周龄的仔猪最易感，其

感染率和死亡率均较高，临床中以呼吸困难、纤维素性

胸膜炎、肺炎及关节炎等多种症状最常见，经常与免疫

抑制性疾病如猪圆环病毒病、猪瘟、猪蓝耳病等混合感

染，可以导致猪的高感染率和高死亡率[4-7]。仔猪副猪嗜

血杆菌病在世界多个国家和地区流行，该病已经成为危

害养猪业的重要细菌性传染病之一[8-10]。国内外相关研究

表明，仔猪副猪嗜血杆菌病主要通过抗生素进行治疗，

由于该病流行广泛，其耐药性已经普遍存在且呈现逐年

增高的趋势，细菌的耐药性给临床用药带来了一定困

难，同时抗生素的使用也危害着人们的健康，药物残留

已成为公共卫生安全的主要问题[11-12]。本试验对采集患

病仔猪病料样品进行 Hps 分离鉴定，并检测副猪嗜血杆

菌的致病性和耐药性，以期为该地区仔猪 Hps 合理用药

提供参考。

1 试验材料与方法

1.1 菌株来源

2021 年采集的衡阳祁东地区不同规模化养猪场及散

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2023 年 第 6 期

养户中患呼吸道病死仔猪口鼻拭子、胸腔积液、肺脏等

病料组织 187 份，将采集的样品进行处理后，进行副猪

嗜血杆菌的分离鉴定。

1.2 细菌分离与培养

将采集的样品进行处理后，在无菌条件下，接种于

巧克力培养基上，在厌氧环境条件下 （5% CO2 培养箱

中） 37℃恒温培养 12～18 h 后，挑取单个菌落接种于

TSB 培养基上进行纯化培养，37℃培养 12～18 h，进行

革兰氏染色、镜检观察其形态学。

1.3 卫星现象检测

参照王同兆等[13]报道的方法，将纯化的分离菌株在

无菌条件下接种于 7%脱纤绵羊血平板上，再在 7%脱纤

绵羊血平板上的中心进行垂直划线接种金黄色葡萄球菌标

准菌株 （CVCC2523），在厌氧环境条件下 （5% CO2培养

箱中） 37℃恒温培养 24～48 h 后，观察 7%脱纤绵羊血平

板上分离菌株的菌落是否有卫星菌落生长与溶血现象。

1.4 细菌 PCR 鉴定

参考王庆云[14]的研究方法，设计鉴定副猪嗜血杆菌

所需的引物，在华大基因合成引物 （表 1）。采用煮沸法

提取具有卫星菌落现象的分离菌株的基因组，并进行

PCR 鉴定。回收 PCR 产物，送生工生物工程 （上海）

股份有限公司进行测序与比对。

1.5 致病性试验

参考王丽荣等[15]的方法，将分离菌株接种于营养肉

汤中，培养至对数期调整菌液浓度为 109 CFU/mL，每

株分离菌株经腹腔注射给 5 只昆明系小鼠，剂量为

0.5 mL/ 只 （109 CFU/mL），对照组小鼠注射等量的无菌

生理盐水。试验期 7 d，观察小鼠的发病情况。

1.6 药敏试验

分离菌株的药敏试验参照美国临床实验室标准化协

会 （CLSI） 2013 年推荐的药敏试验法标准进行操作与

结果判定。

2 结果与分析

2.1 细菌分离培养

疑似副猪嗜血杆菌的菌株通过巧克力培养基、TSB

培养基培养及镜检，观察其形态学结果 （图 1），均符合

副猪嗜血杆菌的培养特性和形态学。

2.2 卫星现象检测

将纯化的分离菌株在无菌的条件下接种于 7%脱纤

绵羊血平板上，进行副猪嗜血杆菌卫星现象检测。结果

显示，分离菌株生长状态良好，出现了典型的“卫星现

象”，分离菌株没有出现溶血现象 （图 2）。

2.3 细菌 PCR 鉴定

对出现了典型“卫星现象”的分离菌株进行 PCR

鉴定。结果显示分离的 78 株分离菌株均扩增出大约为

821 bp 的目的条带 （图 3）。经序列对比 78 株分离菌株

与参考株 （副猪嗜血杆菌） 的同源性均大于 97.9%，说

明分离株为副猪嗜血杆菌，分离率为 41.7% （78/187）。

表 1 引物序列

引物 引物序列（5'-3'） 长度/bp 退火温度/℃

AGAGTTTGATCCTGGCTCAGG

Hps

TACGGCTACCTTGTTTTＧ

821 58.5

图1 分离菌株革兰氏染色 渊1 000伊冤

图 2 分离菌株的卫星现象

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2023 年 第 6 期

M：DL 2 000 DNA marker；1-9：分离菌株

2.4 致病性试验

攻毒组小鼠在攻毒后 2～3 d 出现了不同程度的发

病，且个别攻毒的小白鼠不表现任何症状，而出现急性

死亡，剖检死亡小鼠可见其肺脏、肝脏、肾脏、脾脏出

现了不同程度的出血。通过病料组织分离培养，得到了

副猪嗜血杆菌，攻毒试验结束对照组小鼠健康存活。经

统计，50 株副猪嗜血杆菌能引起小白鼠的死亡，且分离

出的菌株均为致病性副猪嗜血杆菌。

2.5 药敏试验

由表 2 可知，分离的 50 株致病性副猪嗜血杆菌对

青霉素、阿莫西林、氨苄西林等 8 种药物的耐药率为

44.0%～50.0%，对头孢噻呋、头孢噻肟、替米考星等 6

种药物的耐药率为 4.0%～44.0%；说明临床中分离的

50 株致病性副猪嗜血杆菌对常用的治疗猪呼吸系统疾病

的药物有不同程度的耐药性。

3 讨论

副猪嗜血杆菌为养猪业常见的条件性致病菌，该菌

广泛存在于养殖环境中和健康猪只的体内，可以通过多

种途径 （直接接触传播、空气传播、饲料饮水传播等）

在不同猪只之间传播[2]。副猪嗜血杆菌病可引起猪只发

病，急性病例呈现呼吸困难、急性败血症等，具有发病

比较急、死亡率较迅速等特点，为养猪业中常见的急性、

败血性疫病[6]。近年来，关于仔猪副猪嗜血杆菌病的报

道越来越多，尤其对仔猪的危害较大，同时在临床中，

常常发现与其他致病菌 （毒） 混合感染。本试验从衡阳

祁东地区不同规模化养猪场及散养户中采集的 187 份病

料样品中，分离到 50 株致病性副猪嗜血杆菌，说明副

猪嗜血杆菌在该地区猪场中流行严重，可能对仔猪存在

潜在危害性，尤其猪场应注意副猪嗜血杆菌病的防控，

同时注意环境卫生，加强饲养管理，注意对该菌进行合

理疫苗免疫。

临床中，仔猪副猪嗜血杆菌主要通过抗菌药物进行

防治，随着抗菌药物的不合理使用、甚至滥用，导致细

菌对部分抗菌药物产生较强的耐药性，且耐药性菌株不

断出现，同一地区不同养殖场，其细菌的耐药性也存在

差异性，严重影响药物对该病的治疗效果[7,10,11,14]。因此，

在临床中治疗该病时，应做好药敏试验，选择对副猪嗜

血杆菌敏感的药物进行交替使用，同时应该配合环境消

毒。

4 小结

从采集的 187 份病料样品中分离到了 50 株致病性

菌株副猪嗜血杆菌，50 株致病性副猪嗜血杆菌对青霉

素、阿莫西林、氨苄西林等 8 种药物的耐药率在 44.0%

～50.0%之间，对其他药物的耐药率为 4.0%～44.0%，

为该地区仔猪副猪嗜血杆菌病的合理用药及防控提供参

考。

图 3 分离的副猪嗜血杆菌菌株 PCR鉴定结果

表 3 不同剂量的益生菌制剂对仔猪血清免疫指标的影响 表2 药敏试验结果

药物 耐药菌数/株 耐药率/% 药物 耐药菌数/株 耐药率/%

头孢噻呋 4 8.0 多西环素 22 44.0

头孢噻肟 2 4.0 磺胺间甲氧嘧啶 36 72.0

青霉素 47 94.0 氟苯尼考 25 50.0

阿莫西林 43 86.0 恩诺沙星 14 28.0

氨苄西林 42 84.0 环丙沙星 15 30.0

替米考星 12 24.0 大观霉素 38 76.0

红霉素 30 60.0 林可霉素 37 74.0

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