产品信息：

重要提示：

本产品所提供的 APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制10%APS 溶液（0.5g APS 加 5ml 双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可以放置 4℃保存两周。（常温运输，如长期保存建议放置于2-8℃）。产品介绍：

本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的变性PAGE凝胶，方便、快捷。本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中已加入10%SDS，使用时不用另外加入。

注意事项：

1.10% APS 配制后分装-20℃保存。APS 溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的 10% APS。

2.PAGE 凝胶的凝聚速度与温度以及 APS、TEMED 的用量密切相关；在其它条件不变的情况下，可通过改变 APS 及 TEMED 的用量，控制PAGE 凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作；附表中的 APS 及 TEMED 量可供参考，应根据实际操作情况做适当的调整。

3.在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。4.在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。5.丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。6.本产品仅用于科研，不能用于人体试验或人体治疗。操作步骤：

根据蛋白分子量大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1.

组成 保存

PA106-01

40-60块胶

PA106-02

200-300 块胶30%Acr-Bis(29:1) 2-8℃ 100ml 500ml

分离胶缓冲液 2-8℃ 100ml 500ml

浓缩胶缓冲液 2-8℃ 50ml 250ml

APS（过硫酸铵） 室温 0.5g 0.5g×5

TEMED 室温避光 1ml 1ml×5

一、制备分离胶（各试剂使用量请参考附表 3）

1.参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

2.将不同体积的 30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。3.加入 10% APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。4.在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于 mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm 或距梳齿约 0.5 cm 即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的醇或水层，使凝胶表面保持平整。

5.静置 30-60min，待分离胶和醇或水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。二、制备浓缩胶 （各试剂使用量请参考附表 2）

1.去除覆盖在分离胶上的水层。

2.将不同体积的 30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混合。3.加入 10% APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。4.将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。5.将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6.静置 10~20min，等待浓缩胶聚合。

7.待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。8.进行常规电泳操作。

附表 1、SDS-PAGE 分离胶的浓度与最佳分离范围

附表 2、配制 5% SDS-PAGE 浓缩胶（APS 和 TEMED 加入量提供参考，可调整。）SDS-PAGE 分离胶的浓度 最佳分离范围

6%胶 50-150KD

8%胶 30-90KD

10%胶 20-80.KD

12%胶 12-60KD

15%胶 10-40KD

凝胶体积

所需各组分体积（单位：ml)

双蒸水 30%Acr-Bis(29:1) 浓缩缓冲液（4×）10%APSTEMED2ml 1.14 0.34 0.5 0.02 0.002

附表 3.配置 SDS-PAGE 分离胶（APS 和 TEMED 加入量提供参考，可调整。）2405204ml 2.28 0.68 1 0.04 0.0046ml 3.42 1.02 1.5 0.06 0.0068ml 4.56 1.36 2.0 0.08 0.008分离胶

浓度

凝胶

体积

所需各组体积（单位：ml）双蒸水

30%Acr-Bis （29:1）

分离胶缓冲液（4×）10%APS TEMED6%

5ml 2.70 1.0 1.25 0.05 0.00510ml 5.39 2.0 2.5 0.1 0.01015ml 8.09 3.0 3.75 0.15 0.01520ml 10.78 4.0 5 0.2 0.0208%

5ml 2.37 1.33 1.25 0.05 0.00510ml 4.69 2.7 2.5 0.1 0.01015ml 7.09 4.0 3.75 0.15 0.01520ml 9.48 5.3 5 0.2 0.02010%

5ml 2.03 1.67 1.25 0.05 0.00510ml 4.06 3.33 2.5 0.1 0.01015ml 6.09 5.0 3.75 0.15 0.01520ml 8.08 6.7 5 0.2 0.02012%

5ml 1.70 2.0 1.25 0.05 0.00510ml 3.39 4.0 2.5 0.1 0.01015ml 5.09 6.0 3.75 0.15 0.01520ml 6.78 8.0 5 0.2 0.02015%

5ml 1.20 2.5 1.25 0.05 0.00510ml 2.39 5.0 2.5 0.1 0.01015ml 3.59 7.5 3.75 0.15 0.01520ml 4.78 10.0 5 0.2 0.020